浅谈美国疾病控制与预防中心血脂标化工作简介.docVIP

浅谈　美国疾病控制与预防中心(cdc)自50年代开始研究和推行血脂测定标准化。多年来，他们的血脂测定参考方法和参考材料一直作为美国和许多其他国家血脂测定的准确性基础；他们的血脂标准化计划为美国和世界上许多心血管病研究的血脂标准化和临床实验室血脂分析质量的提高做出了突出贡献。了解他们的血脂标准化工作有助于我国血脂标准化的开展。 　　一、概述 　　血脂标准化的核心是准确性的可溯源性。要开展标准化工作，首先要建立一个可靠的参考系统作为准确性基础，然后再将准确性转移到常规分析中去，或使常规分析的准确性可溯源到参考系统所提供的准确性基础上。完整的参考系统包括决定性方法、一级参考物质、参考方法和二级参考物质。目前美国已有总胆固醇(tc)和甘油三酯(tg)决定性方法，而高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)和低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)由于被分析物存在形式的复杂性和目前技术水平的限制，则只有参考方法。tc、tg决定性方法是由国家标准与技术研究所(nist)建立的［1，2］，cdc建立并维持tc、tg、hdl-c和ldl-c参考方法［3］，其中tc参考方法是国家临床实验室标准委员会(nccls)的国家胆固醇参考系统(nrs/chol)的组成部分，tg、hdl-c和ldl-c参考方法也已为国家胆固醇教育计划(ncep)所推荐［4～6］。决定性方法由于其技术和成本的高要求，一般只用于参考方法的评价和监督，而参考方法往往是日常标准化工作的主要角色。目前cdc的tc、tg、hdl-c和ldl-c参考方法和用参考方法准确定值的冰冻血清参考物质实际上在为美国和世界上许多国家的血脂分析提供准确性基础。 　　转移准确性需制定转移计划，亦即标准化计划。cdc与国家心肺血液研究所(nhlbi)的血脂标准化计划是世界上最早的血脂标准化计划。此计划主要通过经参考方法准确定值的冰冻血清物质转移准确性。使用定值血清转移准确性是最简便、最经济的标准化方法，但适合大规模生产、贮存和运输的血清难免要经过一定的处理，如冰冻、冻干等，而这些处理会在一定程度上改变血清性质，使某些分析系统的分析结果出现偏差，即产生基质效应。为此，cdc于1988年建立胆固醇参考方法实验室网(crmln)，以便仪器、试剂生产厂家和临床实验室直接用新鲜血清与参考方法对比分析结果。 　　下面将分别对cdc参考方法、参考血清、cdc-nhlbi血脂标准化计划和crmln作简单介绍。另外，质控调查计划在血脂标准化中也起重要作用，它们与cdc参考系统的关系也将作简单介绍。 　　二、cdc血脂参考方法 　　1.tc：tc参考方法为abell-levy-brodie-kendall(albk)法，包括皂化、提取、显色和比色等步骤。此法移液步骤多，提取和显色也需严格控制，一般情况下难以得到可靠结果。cdc能成功地用作参考方法是由于他们在以下方面做了改进。(1)取样和各部移液均用高性能自动稀释器操作，保证了移液精密度。(2)在取样过程中使用了冲洗程序，即用醇性氢氧化钾(皂化剂)将标准和样品冲入试管中，避免了样品(血清)和标准(乙醇溶液)由于基质不同而对取样准确度的影响。(3)确保提取完全。由于标准和样品的基质不同，胆固醇在提取系统的两相间的分配速度不同，故提取是albk法的关键步骤之一。(4)用计算机将标准、样品和质控的分析顺序随机化，以便明察各分析步骤出现任何系统性漂移。经此改进的albk法精密度能达到变异系数(cv)小于1%，一次最多可分析120个试管，与决定性方法之间的偏差约+1.6%。此法用nist的胆固醇一级标准物质srm 911b作标准。此法除用于tc测定外，也用于hdl-c和ldl-c参考方法中的各项胆固醇测定。 　　2.tg：tg不是单一化合物，其测定比胆固醇复杂得多。目前cdc的tg参考方法分两部分，一部分为“净”tg的化学测定法，另一部分为游离甘油的同位素稀释气相色谱质谱法。tg化学法中用二氯甲烷提取tg，用硅酸吸附各种邻羟基化合物和磷脂，用醇性氢氧化钾水解tg为甘油，用高碘酸氧化甘油，使生成的甲醛与变色酸反应后用比色法测定。取样、提取和皂化中的各步液体转移用稀释器操作，氧化、还原、显色和比色在流动注射分析仪上进行。每次分析的流动注射分析部分都包括一套甘露醇标准，以便结果出现问题时判断问题的来源。此法用supelco的三油酸甘油酯和nist的三软脂酸甘油酯 标准物质srm1595的21混合物作标准。此法的精密度为2%～6%。与决定性方法的初步对比结果显示，此法的测定值不仅是tg，还包括(或部分包括)甘油二酯和甘油一酯。 　　游离甘油的测定用1，3-13c2甘油作内标，用甲醇沉淀蛋白并提取甘油，用正己烷洗去甲醇提取液中的少量脂质，将甲醇提取液挥发干，经衍生后用气相色谱分离、质谱检测甘油衍