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实验5 分光光度法测定青菜中的叶绿素 江南大学《食品化学》课程小组 一、目的 了解叶绿素的分子结构、性质，理解叶绿素性质不稳定的根源，从而提高解决青菜类蔬菜在加工、储藏等过程中出现问题的能力。 掌握食品中某些有效成分的提取、分离以及测定方法。 二、仪器及材料 天平、组织捣碎机、水循环真空泵、抽滤瓶、滤纸、布氏漏斗、容量瓶（1000 mL、100 mL）、分液漏斗2个、尖嘴管、铁架台、铁圈2个、分光光度计； 青菜叶、碳酸钙、丙酮（80%）、乙醚、无水硫酸钠。 三、原理 四、实验步骤 五、注意事项 使用乙醚萃取时，需在通风橱中操作，实验前检查好分液漏斗的密封、通畅性，萃取时勿激烈振摇，以防产生乳化层 叶绿素遇光照和高温不稳，在提取过程中必须控制好这些因素，尽可能在低温、弱光下进行，并缩短实验时间，防止叶绿素的破坏 使用分光光度计时，先要预热；测定时要用乙醚作空白 六、思考题 1、测定叶绿素a、b含量为什么要选用红光的波长？ 2、在破碎青菜叶组织时，为什么要加入碳酸钙或碳酸钠？ 3、为什么叶绿素测定时应尽量可能在低温和避光的条件下进行？ 4、叶绿素a和叶绿素b的结构有何不同？ 5、叶绿素在酶、热、酸的作用下会发生什么变化？ 江南大学《食品化学》课程小组 总叶绿素 = 7.12 A660.0＋16.8 A642.5 叶绿素a = 9.93 A660.0－0.777 A642.5 叶绿素b = 17.6 A642.5－2.81 A660.0 转移 叶绿素乙醚溶液 测定 青菜叶 叶绿素丙酮溶液 组织破碎 吸光度 含量 青菜叶+ CaCO3 +丙酮，捣碎 匀浆抽滤 滤液 85%丙酮洗涤残渣 滤液 比色，计算叶绿素含量 定容 乙醚萃取 洗去丙酮 定容 江南大学《食品化学》课程小组