第五 高效液相色谱法.pptVIP

计算公式： 特点： 无需各组份都被检出、洗脱 需要标样，需要内标样 结果与进样体积无关 对内标物的要求 化学结构与待测组分相似(同系物、异构体) 在样品中不存在 不与样品中组份发生任何化学反应 保留值与待测组分接近 浓度（响应值）与待测组分相当 其色谱峰与其他色谱峰分离好 * * 数据量的加大必须使用SCSI卡. * RF荧光检测器,(气泡影响比较大，由于可能是氧气的存在造成荧光淬灭),电子跃迁，吸收了与其本身特征频率相同的光线后，原子中某些电子从基态中的最低振动能级跃迁到比较高的振动能级。 * 水要经过两次蒸馏处理的（有机质要出去），象二次离子交换水、电渗析水都未除有机质，注射水（针剂水）设备脏，时间长堵柱，最好自己做水，不要用生产设备上的水 纯化水是二次蒸馏水经纯化装置而得到的水（尤其是在短波检测的时候） * 300nm以下时候差异比较大，300nm以上时候差别比较小，主要对短波紫外而言有影响。 甲醇在220nm时候吸收影响很大，一般适用于230nm以上的波段。 * 使用了缓冲盐后一定要清洗柱子和泵，以免损坏，冲洗顺序：水------有机溶剂。 * 纯水或纯溶剂用超声波作用不大（适合于溶剂混合时候使用） 常用脱气的方法：1。吹氮脱气法 2。加热回流方法 3。抽真空脱气方法 4。超声波脱气方法 5。在线真空脱气方法 * 2. 液-液色谱固定相 （1）全多孔型担体 由氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体；早期采用100μm的大颗粒，表面涂渍固定液，性能不佳已不多见； 现采用10μm以下的小颗粒，化学键合制备柱填料； （2）表面多孔型担体 （薄壳型微珠担体） 30～40μm的玻璃微球，表面附着一层厚度为1 ～ 2μm的多孔硅胶。 表面积小，柱容量底； * （3）化学键合固定相 化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定相。 采用化学反应的方法将固定液键合在载体表面上，所形成的填料称为化学键合相。优点是使用过程不流失，化学性能稳定，热稳定性好。 * 化学键合固定相的特点 （1）传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快； （2）寿命长，化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击； 耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定； （4）选择性好，可键合不同官能团，提高选择性； （5）有利于梯度洗脱； 存在着双重分离机制： (键合基团的覆盖率决定分离机理) 高覆盖率：分配为主； 低覆盖率：吸附为主； * 3.离子交换色谱固定相 结构类别： （1）薄壳型离子交换树脂 薄壳玻璃珠为担体，表面涂约1%的离子交换树脂； （2）离子交换键合固定相 薄壳键合型；微粒硅胶键合型（键合离子交换基团） 树脂类别： （1） 阳离子交换树脂（强酸性、弱酸性） （2） 阴离子交换树脂（强碱性、弱碱性） * 4. 空间排阻分离固定相 （1）软质凝胶 葡聚糖凝胶、琼脂凝胶等。多孔网状结构； 水为流动相。适用于常压排阻分离。 （2）半硬质凝胶 苯乙烯-二乙烯基苯交联共聚物，有机凝胶； 非极性有机溶剂为流动相，不能用丙酮、乙醇等极性溶剂 （3）硬质凝胶 多孔硅胶、多孔玻珠等； 化学稳定性、热稳定性好、机械强度大，流动相性质影响小，可在较高流速下使用。 可控孔径玻璃微球，具有恒定孔径和窄粒度分布。 * 气相色谱中的固定相原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。 选择合适的固定相，降低填料粒度可显著提高柱效，但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。 选择短柱、细内径提高分析速度； 研制高效柱填料是一活跃领域。 * 五.液相色谱流动相 1 流动相特性 （1）可显著改变组分分离状况的流动相选择在液相色谱中显得特别重要。 液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。 （2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。 （3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。 * 2 流动相类别 按流动相组成分：单组分和多组分； 按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。