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复件 第三节 动物细胞工程
3. 胚胎分割 切割方法: 酶消化透明带显微玻璃针分割法 显微玻璃针去带分割法 显微手术直接分割法 酶-机械去带分割法 徒手刀片分割法 胚胎分割 3. 胚胎分割 无论胚胎分割的技术操作如何细心,均能对胚胎造成一定的损伤,而且都要做短期体外培养,使受损的胚胎有所恢复,再移植,这样可提高移植受体怀孕成功的概率。实践中应选择合适、简便有效的分割方法。 有学者发现显微手术直接分割法操作比较简单实用,操作时间短,减少胚胎在室内暴露的时间,利于胚胎在受体内的发育生长。 返回目录 胚胎工程的技术方法 1. 人工受精 2. 胚胎移植 3. 胚胎分割 4. 胚胎融合 5. 动物性别控制与胚胎性别鉴定 6. 胚胎冷冻保存技术 7. 试管动物及试管婴儿 (三)胚胎工程 A. 切开整个卵泡 B. 体外成熟 C. 精子获能 D. 体外受精 E. 受精卵培养 F. 检测、冷冻等 G. 移入受体 牛体外受精模式图 1. 卵巢解离 2. 颗粒细胞 3. 卵丘卵母细胞 4. 流体培养系统 5. 受精 6. 体外培养 7. 中间受体培养 (5) 人工受精的优越性 ①人工受精能最大限度地发挥公畜的种用价值,提高公畜的配种效能; ②人工受精保留了最优秀个体用于配种,加速了育种工作的步伐,成为良种增殖和改良畜种的有力手段; ③人工受精减少了公畜的饲养头数,节约饲养管理费用,降低生产成本; ④人工受精利于精液检查,便于适时配种,提供完整的配种记录,及时发现和治疗不孕母畜,有助于解决母畜不孕和提高受胎率; (5) 人工受精的优越性 ⑤人工受精避免公、母畜直接接触,可防止各种疾病,特别是生殖传染性疾病的传播; ⑥解决了公母畜因体格差异不易交配或生殖道异常不易怀胎,不同品种公母畜不愿交配的问题。 ⑦结合精液冷冻保存,使母畜的配种不受地区的限制,解决了公畜不足地区配种问题; ⑧人工受精也是胚胎移植和同期发情技术中一项配套技术措施,为远缘种间杂交试验提供技术手段。 返回目录 胚胎工程的技术方法 1. 人工受精 2. 胚胎移植 3. 胚胎分割 4. 胚胎融合 5. 动物性别控制与胚胎性别鉴定 6. 胚胎冷冻保存技术 7. 试管动物及试管婴儿 三. 胚胎工程 2. 胚胎移植 胚胎移植也称受精卵移植,它是将一头良种母畜(供体)配种后的早期胚胎取出,移植到另一头同种生理状态相同(没排卵、受精、与供体同时发情)的母畜(受体)体内,使之继续发育成为新个体,也称为人工授胎或借腹怀胎。 胚胎移植实际上是由产生胚胎的供体和养育胚胎的受体分工合作共同繁殖后代。 2. 胚胎移植 (1) 超数排卵 (2) 发情同步化 (3) 人工受精和胚胎的采集、鉴别 (4) 胚胎移植 (5) 胚胎移植的意义 (1) 超数排卵 超数排卵是指在母畜发情周期的适当时间用人工的方 法促使其有更多的卵泡发育、成熟、排卵的一项技术,以最大限度地利用母畜的生殖能力。 采用方法主要有体内注射某些促性腺激素,对卵巢产生作用促进排卵。 激素包括:孕酮、雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、促黄体激素(LH)、促性腺激素释放激素(GnRH)等。各类激素都有独特的生理功能,并能相互促进、相互制约,故常搭配使用。 (1) 超数排卵 常采用每天注射一定剂量,连续几天(如5天)的方法进行超排刺激。 以FSH激素为例,一般连续3天递减注射,每天2次,每次间隔8~12h,在后期加注1次LH等效果更佳。 影响超数排卵的因素:供体母牛的品种和年龄、卵巢状况、激素处理剂量与时间,以及营养、季节、地域等。应根据实际情况,多次实验获得合适的方法。 供体超排处理 (2) 发情同步化 同期发情(estrussynchronization) :即同步发情,它利用某些激素制剂人为地控制并调整一群母畜发情同期的进程,在预定的时间内集中发情,以有计划地合理地组织配种。 诱发发情即人工引起母畜发情,指在母畜乏情期内(如绵羊的非繁殖季节、母猪哺乳期、奶牛产后长期不发情)用外源激素或其他方法引起母畜正常发情并配种的繁殖方法。 (2) 发情同步化 以下两个途径实现同步发情,也可结合使用: ①母体施以孕酮激素类药物,并在血液中保持一定量的水平,造成人为的黄体期,使卵巢内卵泡的发育和成熟受到抑制。在卵泡发育状态处于同一时期时,解除人工抑制,母畜即可同步发情排卵,常用的给药方法有阴道海绵拴塞、注射、口服等; ②通过药物人为地控制黄体机能,促使黄体溶解使孕酮水平下降,导致卵泡发育一致、使母畜比较同期地发情排卵。 羊同期发情——放栓 (2) 发情同步化 同期发情的优越性: ①有利于推广人工授精技术,特别是能更迅速、更广泛地应用冷冻精液进行人工授精; ②同期发情,配种、妊娠分娩等过程相对集中,便于商品家畜和畜产品成批上市,有利于更合理地组织生产,
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