第七章 检验基本方法.pptVIP

淘宝才智专线 第七章 检验的基本方法 第六节 显示溶血的检验 一.??? 血浆游离血红蛋白检验 【原理】 血浆中游离血红蛋白检测过氧化酶法（又称联苯胺法），游离的Hb具有过氧化酶样作用，使H2O2催化联苯变为深色最后为蓝色。游离Hb在酸性（ph5.6左右）条件下过氧化酶样活性，碳化联苯胺接受H2O2的氧化发生颜色改变，绿－黄－紫红。于波长530nm处测光密度，与已知血红蛋白浓度样本比色。 【参考值】 小于40mg/L 【临床意义】 1.血管内溶血（蚕豆病、阵发性睡眠 性血红蛋白尿、溶血性输血法应）血浆游离血红蛋白显著增高。 2.珠蛋白生成障碍性贫血、自身免疫性溶血性贫血(温抗体型)微血管性溶血性贫血轻度增高。 3.血管外溶血、红细胞膜缺陷（遗传性球形红细胞增多症）不增多，正常。 二、结合珠蛋白测定 【原理】结合珠蛋白检测，在血浆或血清内血红蛋白的a链与结 合珠蛋白b链结合形成复合物，通过层析检测。在结合珠蛋白抗体的琼脂凝胶板上，加入一定量的受检血清（抗原），抗原在含定量的抗体凝胶中咏动，一定时间后，抗原抗体形成火箭样沉淀峰，沉淀峰的高度与抗原呈正相关，与已知的标准品比较，计算受检样品Hp含量。 1.电泳法：血清结合珠蛋白（HP）是一种a2球蛋白。将待检血清与Hb溶液混合后，使之形成Hp－Hb复合物，在PH8.6条件下进行硫酸纤维膜电泳。 2.比色法：在酸性（PH 4.0～4.2）条件下，Hp－Hb具有比Hb更强的过氧化酶样活性催化过氧化氢与某些愈木酚氧化显色，光密度与Hb量呈平行关系。 3.免疫电泳法： 【正常参考值】 免疫火箭电泳检测0.8～2.7g/L 【临床意义】 1.正常血清Hp大约结合Hb0.3～2.0g/L，男性比女性略高。结合珠蛋白与血红蛋白复合物在单核－吞噬细胞系统、肝内清除，其清除率受Hb浓度的影响，Hb10g/L以下，清除时间（T1/2）为20分钟。 2.Hp减低 见于各种溶血、肝脏疾病或无结合珠蛋白血症、巨幼细胞贫血、先天性无结合珠蛋白血症。 3.Hb增多 见于妊娠、慢性感染、恶性肿瘤、SLE、类风湿性关节炎、胆道梗阻、激素疗法或口服避孕药后，此时血清Hp正常，亦不能排除溶血。 二、血浆高铁血红素白蛋白检测 【原理】血浆高铁血红素白蛋白，检测取定量的血浆用乙醚封顶，加1／10的黄色饱和硫化铵，混匀后形成一个容易识别的铵血色原，用光谱仪观察结果，在绿色区558nm处有一最佳吸收区带。 【结果】正常人呈阴性 【临床意义】 若有血管内溶血，Hp已不存在时，血浆高铁血红素白蛋白的存在能被查出。 三、尿含铁血黄素试验 【原理】 又称Rous试验，在尿沉渣中加入新鲜配制的亚铁氰化钾和盐酸液，含铁血黄素的三价铁变为高铁氰化钾，即普鲁士蓝，尿沉渣细胞内可见到直径1～3um黄色颗粒。 【临床意义】 1.无论有无血红蛋白尿，只要存在慢性血管内溶血，尿中有铁排出，本实验即呈阳性，并可持续几周时间。 2.亦可用硫化铵代替亚铁氰化钾，则形成不溶解的黑色沉淀，证明由含铁血黄素，此即硫化铵法。 第八节 红细胞膜缺陷的检验 红细胞膜缺陷主要是膜成分或膜支架结构异常，导致表面积与体积比可塑性及脆性等发生改变而易于破裂。有的还伴有形态改变膜成分的异常主要是指质的异常；胆固醇的有序排列和含量与膜的变形性有密切关系，磷酯与胆固醇比值和内外双层磷酯含量的变动都会引起溶血。膜支架结构的异常主要是收缩蛋白（区带Ⅰ. Ⅱ）肌动蛋白（区带Ⅴ）及区带Ⅵ-Ⅰ蛋白的磷酸化或相互结合障碍，不能形成牢固的膜骨骼，形成变形的红细胞。 一、红细胞渗透脆性试验 渗透脆性试验检测红细胞在不同浓度低渗氯化钠溶液中的抵抗力配制成磷酸盐缓冲液，氯化钠的浓度为9.0、7.5、6.5、6.0、5.5、5.0、4.0、3.5、3.0、2.0、1.0g／L，另加12.0g／稀释液作为孵育试验用，根据溶血百分率，反映红细胞表面积与体积比值，比值愈大，抵抗力愈大，脆性降低反之则增高。 【参考值】 开始溶血0.44～0.42％（氯化钠溶液）（4.0～4.4g／L）（氯化钠溶液） 完全溶血0.34～0.32％（氯化钠溶液）（3.2～3.6g／L）（氯化钠溶液） 【临床意义】