植物细胞程序化死亡研究进展述要.docVIP

植物细胞程序化死亡研究进展述要 　　摘要：细胞程序化死亡是普遍发生于植物生长发育的各个阶段的种生物现象 。植物编程性细胞死亡或细胞程序化死亡（Programmed Cell death， PCD）的研究早在80年代就开始了，90年代初Greenberg提出在植物对病原体的防御反应中存在类似动物细胞的程序性死亡现象。此后植物PCD现象引起了人们的重视，并成为当前生物学研究的热点。本文对植物器官发生了细胞程序化死亡现象、植物细胞程序化死亡相关的基因研究方法以及针对PCD的概念、研究进展、方法及研究意义等方面进行了简要概述 。 　　关键字：PCD，植物凋亡，程序化，研究展望 　　【分类号】Q942 　　细胞程序死亡（programmed cell death，PCD）也常常被称为细胞凋亡，是生物体发育过程中普遍存在的，是一个由基因决定的细胞主主动的有序的死亡方式。具体指细胞遇到内、外环境因子刺激时，受基因调控启动的自杀保护措施，包括一些分子机制的诱导激活和基因编程，通过这种方式去除体内非必需细胞或即将发生特化的细胞。而细胞发生程序性死亡时，就像树叶或花的自然凋落一样，凋亡的细胞散在于正常组织细胞中，无炎症反应，不遗留瘢痕。死亡的细胞碎片很快被巨噬细胞或邻近细胞清除，不影响其他细胞的正常功能。 　　1、PCD的概念 　　1972年，Kerr等提出了细胞凋亡（Apoptosis）的概念，用来描述多细胞有机体在发育过程中出现的细胞自然死亡现象。由于PCD和凋亡时细胞表现相同的形态特征，因此人们认为细胞凋亡就是PCD。其实凋亡是PCD过程中伴随着出现的特定的形态、生化特征，也有一些细胞在PCD过程中并不表现凋亡的特征，这一类细胞死亡被称为非程序化细胞死亡。由此可见，凋亡是PCD在形态学上的表现，两者不完全等同。 　　PCD是细胞正常发育过程中采取的一种自身基因调控的主动死亡方式，它与一般意义上的衰老、坏死不同，有其固有的特点。PCD发生时细胞和染色质浓缩，细胞膜突出，有PCD小体形成；同时核酸内切酶失活，DNA非随机性断裂成180-200bp的片段，在含溴化乙锭的琼脂糖凝胶上电泳出现典型的“梯状”条带。而坏死则表现为细胞肿胀，质膜丧失完整性，细胞器损伤等特点。 　　2、PCD的检测方法 　　2. 1 细胞形态学观察法 　　（1）电子显微镜。电镜观察，凋亡细胞染色质固缩，常聚集于核膜上呈境界分明的块状或新月形小体， 初期细胞可见完整的细胞器， 细胞膜完整， 凋亡小体形成。 　　（2） 荧光显微镜。对体外培养的活细胞经荧光色素处理， 可在荧光显微镜下观察细胞形态改变。常用荧光色素有吖啶橙、碘化丙啶（P I）、溴乙锭（EB）。 　　2. 2染料排斥法 　　除了电镜能反映细胞膜完整性外， 还可用染料排斥法， 如台盼蓝、P I 等。坏死细胞膜破损， 被染料着染。在正常细胞膜上， 磷脂酰丝氨酸基团（PS） 位于胞内侧， 而在细胞凋亡早期膜上此基团则转向胞外侧， 以利于被吞噬。因此， 磷脂酰丝氨酸基团位置的改变， 可作为凋亡细胞的一个标志。 　　2. 3 反映脱氧核糖核酸有规律断裂的方法 　　（1） 琼脂糖凝胶电泳法。细胞悬液经裂解消化按常规法提取DNA后， 于含EB 的琼脂糖凝胶中进行电泳，正常细胞DNA呈单一条带。 　　（2） 原位末端标记法。通过DNA 多聚酶I 把已标记的核苷酸结合到DNA 的单链断裂处， 以寻找有无Ap 发生。标记的方法有同位素标记、荧光素标记、地高辛或生物素标记等。 　　（3） 原位切口平移法。利用DNA 多聚酶将核苷酸整合到Ap 细胞内断裂的DNA 3′羟基末端， 同时水解5′末端，以修复DNA。若用已标记的核苷酸， 即可显示出有断裂DNA 的细胞。该法同样也可用于细胞悬液中Ap 的观察。 　　3.植物PCD的研究进展 　　在植物细胞学研究中，尤瑞麟首次报道了正常小麦珠心细胞衰退过程的超微结构变化，并引入了PCD的概念。随后Eleftherion研究了小麦原生韧皮部细胞核解体过程中的超微结构变化，但没有提及PCD。王雅清、崔克明用原位末端标记法检测了杜仲次生木质部导管分子的PCD，并对其过程中的超微结构变化进行了系统的电子显微观察。李大辉等人在银杏胚珠贮粉室的早期发育中发现参与形成贮粉室的珠心细胞死亡是PCD过程.有资料表明，植物体内导管分子的发育形成过程也是典型的PCD反应。 　　在生理条件下，生物体内细胞存活与死亡由植物自身发育阶段提供的遗传信息，或由临近细胞和其微环境提供的信号决定的。其中包括细胞相互接触提供的信号以及周围环境中的活性物质、激素等。Orzaez和Granell发现乙烯处理豌豆可促使其心皮衰老及DNA降解，Morgan等发现乙烯介入玉米根中缺氧和机械障碍诱导的通气