生物选修三 基因工程的基本操作程序.pptxVIP

温故而知新1、DNA重组技术的基本工具有哪些？2、限制酶的来源、作用、作用结果分别是什么？有何特点？3、DNA连接酶有几种？作用是什么？4、DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？5、运载体的作用是什么？常用的运载体有哪些？6、运载体的条件有哪些？基因工程基本操作的四个步骤1.2 基因工程的基本操作程序1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定一、目的基因的获取请阅读P9,了解：目的基因、基因文库的概念编码蛋白质的结构基因1、目的基因主要是指______________________请举出三个以上的例子2、获取目的基因的常用方法有哪些?（1）从基因文库中获取（2）利用PCR技术扩增（3）人工合成基因组文库②基因文库种类 部分基因文库（如:cDNA文库）（1）从基因文库中获取目的基因①.基因文库 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库基因文库的本质是含有某生物基因的菌体群③基因文库的构建（1）基因组文库的构建提取某生物全部DNA许 多DNA片段该生物基因组文库与载体连接导入受体菌群用适当限制酶切割（每个受体菌含有一段不同的DNA片段）（2）cDNA文库的构建——mRNA反转录形成核酸酶HDNA聚合酶该生物cDNA文库逆转录酶与载体连接导入受体菌群双链DNA(cDNA)mRNA杂交双链单链DNA建立基因文库是通过对受体菌的培养而储存基因 ④怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢?基因组文库与部分基因文库的关系根据基因的有关信息：如基因的核苷酸序列、基因在染色体上的位置、基因转录的mRNA，以及基因表达的产物等。受体细胞产生特定性状目的基因外源DNA扩增分离（2）利用PCR技术扩增目的基因PCR技术—聚合酶链式反应PCR扩增仪原理：前提：条件：DNA双链复制的基本原理一段已知目的基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸(dNTP) DNA的两条链为模板热稳定DNA聚合酶(Taq酶）一对引物一对寡核苷酸序列：与目的基因的起始段互补温度控制3/5/G—GT—CA—G3/5/引物Ⅰ3/5/C—CG—A复性引物ⅡG—G5/3/延伸变性1.目的基因DNA受热变性，解链；2.引物与单链互补结合；3.合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸。（3）利用PCR技术扩增目的基因过程：a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________氢键单链DNAb、复性（55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。 双链c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从 引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补 的________。 DNA链（3）人工合成法根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 根据已知蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。蛋白质的氨基酸序列推测mRNA的核苷酸序列推测结构基因的核苷酸序列化学合成目的基因总结目的基因的获取：三种方法(1)从基因文库中获取适用于目的基因序列为未知的情况(2)利用PCR技术扩增适用于目的基因的序列为已知的情况(3)人工合成适用于目的基因不是很大且其序列是已知的寻根问底（1）为什么要构建基因文库？直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗？提示：构建基因文库是获取目的基因的方法之一，并不是惟一的方式。如果所需要的目的基因序列已知，就可以通过PCR方式从含有该基因的生物的DNA中，直接获得，也可以通过反转录，用PCR方式从mRNA中获得，不一定要构建基因文库。但如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段，或想从一种生物体内获得许多基因，或者想知道这种生物与另一种生物之间有多少基因不同，或者想知道一种生物在个体发育的不同阶段表达的基因有什么不同，或者想得到一种生物的全基因组序列，往往就需要构建基因文库。DNA连接酶重组DNA质粒限制酶目的基因二、基因表达载体的构建—— 核心限制酶1.用一定的_________切割质粒，使其出现一个切口，露出____________。2.用_____________切断目的基因，使其产生______________。黏性末端同一种限制酶相同的黏性末端3.将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒）切口DNA连接酶二、基因表达载体的构建—— 核心 过程DNA分子质粒同一种限制酶处理一个切口两个黏性末端两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）资 料: 科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂