临床护理专业-人类基因组计划-l.pptVIP

转录图与EST的现实意义： 1、为估计人类基因的数目提供较为可靠的依据。 2、提供不同组织、不同发育阶段的基因表达的数目、种类及结构，特别是序列的信息。 3、提供了鉴定基因的探针，以EST可从“全长cDNA文库”筛到全长cDNA。 4、本身就有直接的经济价值。 作为“基因组”的一种物理标记，EST尚缺少定位的信息。现在可用FISH及比较基因组杂交（CGH）来基因定位。 （四）序列图 以DNA测序绘制序列图，是分子水平的最高层次的、最详尽的物理图。 测序总长度约为1m，由30亿核苷酸组成的序列图是人类基因组计划中最为明确、最为艰巨的定量、定质、定时的任务。 目前，测定技术的限制：由于一次测序反应尚不能超过1Kb，效率低而不被大规模采用。 目前测序中心的主要策略：以大片段克隆建立插入片段约10Kb左右的质粒亚文库，再随机挑选质粒单克隆分别测序，再以电脑程序进行装配。 使用Sequation自动化测序仪： 一天能进行2万个测序反应。 技术核心主要为Sanger等“酶促末端终止法”+聚丙烯酰胺电泳+扫描隧道电镜。 最有前途：DNA芯片（DNA距阵） ——思路类似于“寡核苷酸反向杂交法”；目前在晶体上以“光刻法”直接合成高密度的可控制序列寡核苷酸的技术突破，已在建立单核苷酸多态性（SNP图）、表达图、大规模突变检测等方面具有重要实际价值。 2001 The HGP consortium