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从基因工程菌中释放提取白介素13的研究 PAGE 2 PAGE II 摘 要 人白细胞介素13（interleukin 13，IL－13）是近年来发现的一种细胞因子，是造血因子家族的新成员，具有调节B淋巴细胞及单核细胞、抑制HIV复制、促进原始造血前体细胞的增殖及分化等功能。本论文用超声波核化学渗透两种细胞粉碎方法对IL－13基因工程菌进行了细胞破碎实验，并系统地考察了pH、温度、时间、化学试剂等因素对细胞破碎效果的影响，得出了最佳的细胞破碎核包涵体融解工艺条件。将破碎后的菌悬液用双水相萃取的方法进行了目标产物的初步分离纯化，并对双水相体系的各影响因素进行了深入细致的研究。这将为我们进一步地研究以包涵体形式存在于基因工程菌内地目标产物分离纯化新方法打下良好的基础。 关键词：IL－13，包涵体，细胞破碎，双水相，分离 Abstract Interleukin (IL-13) is a recently descried protein and a member of the family of hematopoietics. It is a protein in vitro modulator of B lymphocyte and monocyte functions. Recently, it was reported that it also could inhibit the HIV replication in monocyte and regulate proliferation and differentiation of primitive hematopoietics progenitor cells. In this study, we try disrupting JM109 cells by means of ultrasonic and chemical osmosis,primarily testing the functions of pH, temperature, time, chemical reagent and so on, and achieving an optimal process of cell disruption and inclusion solution. In addition, we carry on the partition of GST-IL-13 by aqueous two-phase system and carefully check the effects of the main processing parameters. Key words：IL-13, inclusion, cell disruption, aqueous two-phase, Partition 从基因工程菌中释放提取白介素13的研究 目 录 TOC \o 1-2 \f \h \z HYPERLINK \l _To第一章 前言 1 HYPERLINK \l _To1.1 发展生化“下游”技术的意义 PAGEREF _To\h 1 HYPERLINK \l _To1.2 基因工程蛋白质分离纯化的原则 1 HYPERLINK \l _To1.3 现有白细胞介素－13的分离纯化方法 7 HYPERLINK \l _To1.4 蛋白质分离纯化的方法 9 HYPERLINK \l _To1.5 本论文的立项背景及研究内容 12 HYPERLINK \l _To第二章 实验材料与方法 13 HYPERLINK \l _To2.1 概述 13 HYPERLINK \l _To2.2 实验材料与方法 15 HYPERLINK \l _To第三章 实验结果与讨论 17 HYPERLINK \l _To3.1 GST－IL－13的诱导培养 17 HYPERLINK \l _To3.2 GST－IL－13总含量的测定 20 HYPERLINK \l _To3.3 化学破碎 22 HYPERLINK \l _To3.4 GS双水相萃取的研究 23 HYPERLINK \l _To第四章 结论与展望 24 HYPERLINK \l _To4.1 结论 24 HYPERLINK \l _To4