孕早期绒毛细胞原位杂交监测hcmv宫内感染的价值.pdfVIP

同济医科大学 硬士学位论文 HCMV—DNA探针购自北京医科大学病理室。 ②探针的标记 上加六核苷酸混合液(Hexanucleotide Mix)2肛l、dNTP2肛l、Klenow 0．2MED- enzymeltA混匀并短暂离心，37C孵育至少60rain；加29l 4M LiCl和75tzl TA(PH8．o)终止反应；沉淀标记DNA：加入2．59l 之。 ③绒毛细胞制片’ 1640漂洗后，加lml固 挑选绒毛5—10mg，生理盐水或RPMI 定液(甲醇3。冰乙酸1)离心去上清，再固定二次，每次20min，继之 反固定(甲醇1：冰乙酸2)30min，去除绒毛枝，细胞悬液涂片(玻片 已硅化处理)，置一20℃待检。 ④原位杂交流程 。 X 3rain，0．01M 次×3min。预杂交；杂交液即5XSSC；O．5％Blockingreagent(w／ (湿环境)，骤冷，盏玻片(已硅化)，石蜡封片，42C 16hr；去盖玻片，用 Tris—c1 SSC漂洗1次×5min，Buffer PH7．5及0．15M I(O．1M 口 同济医科大学 硕士学位论文 NaC|)漂洗4次×3rainfBuffer I[o．5％Blockingreagent，Buffer Tris--C1；0．1MNaCl；0． I漂洗4次×3min后用BufferⅢ(O．1M 05M 用Buffer I冲洗未结合的显色剂，中性树胶封片， ⑤结果判断；光学显微镜下观察，蓝紫色颗粒者为阳性。 三、统计学方法 部分数据采用校正X2检验。 ’ 结 果 一、母血清HCMV抗体检测结果 G阴性者10例，总阳性率 78例早孕妇女，IgM阳性、Ig 例；无IgM、IgG均阳性者。 表1两组孕妇HCMV--IgM阳性率 PO．05 二、绒毛组织HCMV DNA检测结果 78份绒毛HCMV DNA阳性31侧，其中7例母血HCMV IgM 10 同济医科大学 硕士学位论文 (+)，24例母血(一)。 本研究宫内HCMV感染率为39．74％，与闻良珍等o’报道相近， 国外n2’报道为20一40％。另外，本研究有24例母血HCMV IgM (--)而绒毛HCMV 胎儿外还存在其他途径，陈素华等n∞报道单纯通过血行性胎盘感染