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第一章 文献综述 的SCAR标记。 1．2．1．2．3小卫星DNA 度为10—60bp的核心序列串联重复形成的可达25Kb的串联重复序列，可遍布于基因组的 很多位点(E1y 核生物亦如此。小卫星DNA在真核基因组中具有多等位性、高丰富性和极强的保守性， 在不同个体之间存在有串联数目的差异，这种多态性可能是在DNA复制或不等交换过程 谱进行杂交，从而得到该物种的DNA指纹图谱。因其含丰富的多态信息，选择合适的限 制酶类和探针，便可得到具有个体特异性的指纹图谱。目前已经发现了～些十分有用的 参试的56个普通小麦品种，是绘制小麦指纹图谱非常有用的探针。 1．2．1．2．4微卫星DNA(又称simplesequencerepeats，简称SSR) 在人类及动植物的基因组中，均存在着许多由1-5个碱基对组成的简单重复序列， 每个座位上重复单位的数目及至重复单位的序列都可能不完全相同，因而造成了每个座 异。可见SSR标记的多态性信息含量是较高的。由于每个微卫星DNA两端的序列多是相 对保守的单拷贝序列，因而可根据其两端的序列设计一对特异引物，通过扩增而产生多 态性。 AFLP 1．2．1．2．5 选择性扩增基因组DNA的酶切片段，由于不同材料的DNA酶切片段存在差异，因而便产生 了扩增产物的多态性。选择性扩增是通过在引物3’端加上选择性核苷酸而这现的，改 变选择性核苷酸的数目，就可以预先决定所要扩增的片段的数目。可见AFLP实际上是 RFLP着NPCR相结合的一种方法，它结合了RFLP稳定性PCR技术高效性的特点。 AFLP可以分析基因组较大的作物，其多态性很强，利用放射性标记在变性的聚丙烯 酰胺凝胶上可检测到100-150个扩增产物，因而非常适合绘制品种的指纹图谱及进行分 AFLP虽产生不久却倍受青睐，己应用于水稻(Mackill，1996，Choet．al，1996； Maheswaran 87]、 et．al，1997)[138,131,I39]、大豆(Keim 土豆(Bachem 6 陕油8号种子纯度的鉴定研究 过RFLP、RAPD等技术，因而被认为是指纹图谱技术中多态性最丰富的一项技术，可应 用于一般分子标记技术的所有应用范围(张修军，1999)U7]。但该技术的缺点是需要同 位索检测，同时成本也较高，另外AFLP已申请专利，人们可以自由利用该项技术用于非 赢利性的科学研究，但生产及商业上的应用受到限制。近来用银染法代替同位索法检测 扩增产物，取得较好的效果，不仅降低实验成本，缩短试验周期，而且提高了AFLP技术 的实用性(张峰，[999)【l”。 end of 方法，称为随机末端引物重复序列间扩增(randomprimeramplification interspersed 稻品种的大多数，并能识别其中三个人为设置的重复。现代分子标记技术发展非常迅速， 随时都会有新的标记技术被发明、被利用。密切注视这方面的发展动向，就能不断以新 的、先进的分子标记技术丰富DNA指纹图谱技术。CAPS法可靠检测某等位基因中，因～ 个碱基突变而产生的独特的限制酶切位点，但通常单个碱基的突变大多数不能创造这样 与生物信息学的发展，已促成了一种新型标记一单核苷酸多态性(SNP)的迅速发展，由 于其数量极其丰富、遗传稳定、适于自动化分析而将成为一种重要的品种鉴定技术。 1．2．2指纹图谱的应用 1．2．2．1品种鉴定和新品种登记 新品种审定前，需要确定该品种的特异性、一致性和稳定性，找到该品种区别于其 它已有品种的特征。因此，作物品种的鉴别技术需具备4个基本准则，即环境的稳定性、 品种间变异的可识别性、最小的品种内变异及实验结果的可靠性。随着育种进程的加快， 作物品种急剧增加，这就对品种鉴定提出了更高的要求。指纹图谱技术不仅完全符合上 述4个基本准则，相对于早期的形态学标记，具有简便迅速等优点，因而是品种评价鉴 定中较好的遗传标记。在我国建立起主要作物品种的标准指纹图谱，对于保护我国名、 优、特种质及育成品种的知识产权和育种家们的权益等均有重要意义。 1．2．2．2品种纯度和真实性检验 在育种上，需要知道新育成品种或品系的遗传纯度；对