医学微生物实验报告.docxVIP

微生物实验报告题目脓汁和粪便标本中病原菌的检测成绩年级专业实验者学号组号小组成员指导老师一、 实验目的1.了解细菌生长的基本营养条件以及培养基的种类。2.掌握培养基制备的原则和一般方法。3.掌握无菌操作技术。4.掌握病原菌的分离与培养方法。5.掌握油镜的正确使用。6.掌握细菌涂片标本的制备以及革兰氏染色法。7.熟悉几种常用的细菌生化反应的名称、原理、方法、结果分析及用途。8.掌握血浆凝固酶试验的原理、方法及用途。9.掌握纸片扩散法检测药物敏感性原理及应用。10.掌握玻片凝集试验的原理方法、方法、结果观察与判断。 二、 实验器材1．药品与试剂：营养琼脂粉、营养肉汤粉、半固体琼脂粉、蒸馏水、脓汁标本、粪便标本、普通营养琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板、斜面培养基管、液体培养基管、半固体培养基管、结晶紫染液（第1液）、卢戈氏碘液（第2液）、95%酒精（第3液）、稀释石炭酸复红（第4液）、香柏油、二甲苯、葡萄糖发酵微量管、乳糖发酵微量管、兔血浆、生理盐水、诊断血清、Muller-Hinton琼脂平板、青霉素滤纸片、链霉素滤纸片、庆大霉素滤纸片 2. 器材： 1500W电炉、天平、称量纸、药勺、三角烧瓶、量筒、试管、刻度吸管、洗耳球、棉塞、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、试管筐、尺、平皿、酒精灯、电炉、接种环、接种针、染色架、吸水纸、擦镜纸、打火机、笔、显微镜、小砂轮、载玻片、镊子、试管刷、冰箱、恒温培养箱三、 方法与步骤1、培养基的制备：培养基称量干粉培 养基(g)水量(ml)煮沸(次）分装(ml)备注营养琼脂11.43002瓶，500ml锥形瓶，平板营养琼脂2.9753515支，中试管，斜面营养肉汤1.1501115支小试管，液体半固体琼脂1.7603315支，小试管，高层干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里，然后罩上硫酸纸、牛皮纸，用 橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到髙压蒸汽灭菌室→灭菌（用于倒平板的培养基不用加热溶解，摇匀即可）2、细菌的分离培养平板划线分离法甲→脓汁标本→营养琼脂平板(黄色）乙→脓汁标本→营养琼脂平板(黄色） 丙一粪便标本一伊红美蓝平板(紫色）丁一粪便标本一伊红美蓝平板(紫色）方法：（1)右手拿接种环（如握笔式)，烧灼灭菌，欲伸入试管内的接种环杆部分亦要 迅速通过火焰2~3次，以杀灭其表面细菌；（2)左手握住盛有标本的试管的下端，右手以无名指、小指与手掌在火焰旁拔出试管棉塞并挟住之，将管口迅速通过火焰三次灭菌；（3)立 即将已灭冷却的接种环伸入试管内，沾取标本（或菌液）一环，试管口火焰灭菌后塞好棉塞; (4)左手斜持平板，略开盖，在酒精灯火焰左前方约5~6cm处，将接种环上的菌液涂抹于平板表面的边缘部分；（5)烧灼接种环，冷却后，从原涂抹部分开始，连续平行划线，每次只划平板的1/4~1/5，划毕后接种环再经火焰灭菌，冷却后用同样方法在平板其余部分划线， 每次划线要与前次划线重叠1-3条，共计3^次（区)；（6)接种完毕，将接种环烧灼灭菌后方可放下；（7)将培养皿倒置，37°C培养34小时后，观察结果。3、细菌的纯培养斜面接种分工甲→普通平板→黄色菌落→1支斜面 乙→普通平板→白色菌落→1支斜面 丙→EMB平板→紫黑菌落→1支斜面 丁→ EMB平板→粉红菌落→1支斜面 方法：接种环→套住菌落→轻刮取菌→接种环取菌后，伸入斜面底部，自下向上先拉 →条细菌接种线→再伸入底部，自下向上，作蜿蜒划线→细菌涂布接种在斜面培养基的表面 →斜面正面上2/3作标记：组号、颜色→收集平板-灭菌桶内（平板底部朝下，盖朝上放置）→速送灭菌室→高压蒸汽灭菌→洗刷。4、细菌的形态学检查涂片→干燥→固定→染色(1)涂片→干燥→固定甲→黄色，紫黑。 乙→白色，粉红。丙→黄色，紫黑。丁→白色，粉红。方法：涂片：①接种环取盐水3ulX2滴，水滴间距小于2cm;②取菌苔少许（1mm小菌落半个）与盐水混勻，涂成大于lcm2;③涂毕→环移至涂膜中央侧立，待环内菌膜破裂，接种环烧灼灭菌。→干燥→固定：手持载玻片→端，涂膜朝上，两个涂膜快速通过火焰外层3次，时间2?3秒钟。(2)革兰染色涂片→干燥→固定→结晶紫→初染1分钟→水洗→卢戈碘液→媒染1分钟→水洗→ 95%乙醇→脱色约20秒钟—7尺洗—稀释品红—复染1分钟—水洗—吸干，镜检。油镜使用方法：10X物镜—看清标本—滴加香柏油—100X油镜—浸泡油 中→模糊物象→细调节调焦，观察物像→记录结果→关闭电源→擦镜纸拭去香柏油 —擦镜纸沾少许乙醇和乙醚（7:3)混合液擦拭→擦镜纸擦拭油镜。5、液体培养基接种（肉汤接种）甲→黄色，乙→白色，丙→紫黑，丁→粉红。方法：（1)接种环斜面取菌，在靠近液面的管壁上，上下研磨接种；（2)在管壁上， 将