甘肃省永昌县第一中学高中生物人教版课件选修3基因工程复习.pptVIP

三 基因进入受体细胞的载体 ——分子运输车 1.载体需要的条件： ⑴ 能够在宿主细胞中复制并稳定的保存。 ⑵ 具多种限制酶的单一切点以便与外源基因连接 ⑶ 具某些标记基因，便于进行筛选。 2.常用运载体： ⑴ 细菌的质粒 ⑵ 噬菌体或动植物病毒 第二节 基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 1、目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的结构基因 也有一些具有调控作用的因子 2、获取目的基因的方法[来源:Zxxk.Com] （1）从基因文库中获取 （2）利用PCR技术扩增 （3）人工合成 ________________________________________ (一)从基因文库中获取目的基因 1.基因文库 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 2.基因文库的分类: 种类 基因组DNA文库：含有一种生物的 全部基因 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：cDNA文库 提取生物某发育时期的mRNA 单 链DNA 逆转录酶 DNA聚合酶 双链CDNA (只含该生物部分基因) 与载体连接导入到受体菌群储存 cDNA文库 文库类型 cDNA文库 基因组文库 文库大小 小 大 基因中启动子 无 有 基因中内含子 无 有 基因多少 某种生物的部分基因 某种生物的 全部基因 物种间的基因交流 可以 部分基因可以 基因组文库和cDNA文库比较 ①概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件：___________、_______________、___________ 、 ___________ 、__________ ______________________________、_____________________________。_ ②原理：__________ 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 模板DNA 四种脱氧核苷酸 DNA引物 热稳定DNA聚合酶 （二）利用PCR扩增目的基因 ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） ⑤结果：_______________________________________________________ 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内大量扩增 Mg2+(激活剂) 缓冲溶液 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 （三）人工合成 若基因_____，核苷酸序列______ ，可用此法。 较小 已知 a、使目的基因在受体细胞中稳定存在 并遗传给子代 b、同时使目的基因能表达和发挥作用 思考：作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？ 1、基因表达载体的作用 二、表达载体的构建 2、基因表达载体的组成： 2、基因表达载体的组成： 目的基因 质粒 启动子 终止子 ①用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 ②用_____________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。 3、基因表达载体的构建 ③将切下的目的基因片段插入质粒的______处， 再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 的黏性末端 切口 DNA连接酶 相同 三、将目的基因导入受体细胞 （一）转化： （二）方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 检测— 鉴定—— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 DNA分子杂交 抗原抗体杂交 个体水平的鉴定 四、目的基因的检测与鉴定 判断：[来源:Zxxk.Com] 1、限制酶有4000多种，全部来自原核生物。 2、DNA连接酶和DNA聚合酶作用 部位相同它们具有相同的功能。 4、质粒