人类辅助生殖技术应用概述课件.ppt

人类辅助生殖技术应用概述;人工授精 夫精人工授精 赠精人工授精 常规体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET） 常规体外受精 单精子卵胞质内注射（intracytoplasmic sperm injection, ICSI） 射出精 睾丸/附睾精 植入前遗传学诊断（preimplantation genetic diagnsosi, PGD）;适应证 男方因素 宫颈因素 免疫因素 女方排卵障碍 不明原因性不孕 步骤;2010-5-15;2010-5-15;适应证 输卵管盆腔因素 子宫内膜异位症 排卵障碍经促排卵治疗无效 严重少弱畸精症 无精症 反复IUI失败 免疫性不孕; ; ; ;ART临床治疗风险;;取卵术后卵巢改变;卵巢过度刺激综合征（ovarian hyperstimulation syndrome, OHSS）;病理及临床表现;卵巢过度刺激综合征（ovarian hyperstimulation syndrome, OHSS）;OHSS分度;OHSS分度;体外授精-胚胎移植的实验室步骤;实验室仪器设备 实验室质控 体外授精 胚胎培养 胚胎移植 胚胎冷冻 胚胎解冻;A、显微操作系统 B、程序冷冻仪及液氮罐 C、CO2浓度测试仪和温度测试仪 D、电子天平，超纯水仪和渗透压仪 E、冰箱 F、空气净化设备 G、CO2和N2，混合气体气瓶;1、显微镜 A、相差显微镜 B、体视镜 C、倒置显微镜 D、荧光显微镜;IVF工作站;CO2培养箱： ;1、质量控制： 温度：23±3 ℃ 湿度：30 ～60% 气压： ≥10Pa 尘埃：百级（配子操作区），万级（胚胎实验室），十万级（更衣室，取精室） 可挥发有机物（VOC）： ＜ 0.5ppm 振动，光照及噪音：;2、管理： A、按功能和清洁度分区 B、实验室禁止吃，喝，抽烟以及使用化妆品 C、培养箱和温台的监测 D、冰箱的监测 E、液氮罐的监测 ;实验室禁止使用酒精等可挥发性有机物和紫外照射 可用蒸馏水擦拭台面 可用专用洗涤剂擦拭可能会被污染的台面或者区域 可使用吸尘器吸走灰尘 培养箱的清洁和消毒;1、温度和湿度：37.0±0.1℃，90% 2、pH：7.1 ≤ pHi ≤ 7.2， 7.2≤ pHe ≤7.4 3、气体：CO2和O2 4、渗透压：270 ～ 290mOsm/kg;培养基的基本组成 水：99% 无机盐：维持培养基的渗透压和酸碱度 碳水化合物：提供胚胎发育的能量 氨基酸：促进胚胎体内外发育 维生素：调控细胞代谢 激素和生长因子：促进胚胎发育 大分子物质：维持胶体渗透压，中和毒素 抗氧化剂：减少氧自由基对胚胎的损伤 螯合剂：螯合重金属离子 抗生素：防止污染 ;培养液配制和平衡;单气培养：CO2(5-6%)，O2(21%) 和N2(74%) 三气培养：CO2(5-6%)，O2(5%) 和N2(90%) 优势：更接近生理状态（2-8% O2）;1、精子的形态结构;2、卵子的形态结构;异常卵母细胞;1、常规体外授精 ;2、卵胞质内单精子注射（ICSI）;人胚胎体外发育;异常受精;胚胎发育阶段：卵裂球的数目 胚胎形态学评分： 胚胎的碎片评分： ;1期：囊胚腔小于胚胎体积的一半 2期：囊胚腔大于胚胎体积的一半 3期：完全囊胚，囊胚腔与胚胎体积相等;4期;胚胎移植数目： 35岁以下第一周期：2个 35岁以上或者第二周期以上：3个 单胚胎移植： ;胚胎移植管装载;1、精子冷冻： 2、卵子冷冻： 3、胚胎冷冻： 4、生殖组织冷冻：;程序化冷冻（慢速冷冻） 玻璃化冷冻（快速冷冻）;;;;2.装管 ;冷冻前;囊胚冷冻前人工皱缩;控制性超排卵 B超监测下取卵 体外受精和胚胎培养;常染色体隐性遗传病 β-thalassaemia Cystic fibrosis Spinal muscular atrophy Sickle cell disease;PGD适应证-染色体病;胚胎活检;男方45，XY，t(13;14)(p10;q10) 胚胎D 3 FISH结果与D 5/ D 6 array CGH结果对比 ;非整倍体筛查-SNP芯片;谢谢