棉花遗传转化体系构建及ataba2基因转化-construction of cotton genetic transformation system and transformation of at aba 2 gene.docxVIP

缩写词英文缩写英文名称中文名称MSMurashigeandSkoog(medium)MS(培养基)LBLuria-Bertani(medium)LB(培养基)ABAAbscisicacid脱落酸H2O2Hydrogenperoxide过氧化氢ROSReactiveoxygenspecies活性氧KanKanamycin卡那霉素GlcGlucose葡萄糖ManMannitol甘露醇RifRifampicin利福平dNTPDeoxynucleotidetriphosphates(usuallyamixtureof脱氧腺苷三磷酸(dATP/dTTP/dCTP/dGTP的dATP/dTTP/dCTP/dGTP)混合物）EDTAEthylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸O2·?Superoxideanions超氧阴离子PCRPolymerasechainreaction聚合酶链式反应TAETris-acetateelectrophoresisTris-乙酸电泳缓冲液TrisTrishydroxymethylaminomethans三羟甲基氨基甲烷XANXanthoxin黄氧素ZEPZeaxanthinepoxidase玉米黄质环氧酶NCED9-cis-epoxycarotenoiddioxygenase9-顺-环氧类胡萝卜素双加氧酶KTKinetin细胞分裂素2,4-D2,4-dichlorophenoxyaceticacid2,4一二氯苯氧乙酸AAOABAaldehydeoxidaseABA醛氧化酶暴争恶1、前言棉花是最重要的纤维作物，在全球80多个国家均有种植。我国作为世界上最大的棉花生产和消费国，也是世界上主要棉花进口国之一。因此，培育优良的棉花新品种具有重要的意义。干旱对于棉花生产的影响最为严重。其造成的损失几乎是其它自然灾害所造成损失的总和。同时，我国淡水资源严重短缺，农业生产越来越受到严峻的挑战，通过提高棉花的耐旱能力和水分利用效率来增加其产量，已成为我国棉花育种发展的重大需求。传统的棉花育种方法周期长长，受种间亲和性和种内基因资源的限制。随着植物基因工程的发展以及大量抗早、耐盐基因的鉴定和克隆，利用基因工程方法培育抗早、耐盐作物新品种己成为开发利用早地和盐碱地的重要手段。1.1、抗逆棉花新种质创制研究进展1.1.1、目前所获得的功能基因及在作物上的应用抗虫基因：目前已分离出多种外源凝集素基因,可以有效地提高植物的抗虫能力[1]。目前，应用于棉花的主要有豌豆外源凝集素和雪花莲外源凝集素。棉花生产上广范种植应用的转基因抗虫棉使用的主要是Bt基因或Bt基因与CPTI基因联合使用[2-5]。抗病基因：乐锦华等用花粉管通道法将菜豆几丁质酶基因与烟草6-1,3-葡聚糖酶基因双价植物表达载体导入新疆棉花主栽品种,得到抗病性良好且遗传稳定的转基因棉花[6]。吴家和等用农杆菌介导胚性愈伤的办法将几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖双价基因转入冀合321和中棉所35，选择得到7个抗病株系[7]。抗除草剂基因：目前，可以编码膦丝菌素乙酰转移酶的基因有两种：bar基因和pat基因[8]。通过转化bar或pat基因，可以得到抗PPT的各种农作物。Rathore等用水稻原生质体为外植体转化bar基因，得到抗草丁膦的水稻[9]。Cooley等用基因枪对水稻进行bar基因的转化，得到抗草丁膦更强的后代。对胡萝卜和烟草的pat基因遗传转化也有成功报道[10]。2,4-D是一种常用激素，它主要通过干扰植物生长代谢而抑制杂草生长。Lyon等(1989)从土壤菌中克隆到2,4-D单氧化酶基因并转移到烟草中。Bayley(1992)得到可抗0.1%的2,4-D转基因棉花[11]。棉花纤维品质基因：近年来，棉纤维品质分子遗传改良种研究刚刚起步。中科院植生所从大白兔血细胞总DNA中扩增出兔角蛋白基因的编码序列，并将该基因序列与棉纤维特异表达启动子连接，通过花粉管通道法转入棉花，部分转基因棉花的纤维伸长率明显增加，纤维比强度有所提高[12]。张震林和陈松等采用花粉管通道技术，将棉纤维细胞特异表达启动子驱动的蚕丝芯白基因导入陆地棉品种泗棉3号，转蚕丝芯蛋白基因棉花T1代纤维比强度达到提高21%[13]。抗逆基因：对于抗逆基因的研究以抗衰老基因的研究最多。异戊烯基转移酶基因是编码细胞分裂素生物合成限速步骤合成酶的功能基因，首先在根癌农杆菌中得到鉴定。董春海等把与植物生长素合成酶有关的农杆菌tms、tmr基因导入了棉花[14]。付永彩等利用基因枪法将抑制衰老的嵌合基因PsAG12-ipt转入水稻,观察并分析了Tl代转基因植株成熟期的形态,证明了抑制衰老的自我调节系统在部分转基因水稻中表达,叶片衰老受到明显的抑制[15]。利用农杆菌介导法将ipt基因导