绿咖啡豆中绿原酸的提取纯化及其提取物抗氧化活性的分析-extraction and purification of chlorogenic acid from green coffee beans and analysis of its antioxidant activity.docxVIP

绿咖啡豆中绿原酸的提取纯化及其提取物抗氧化活性的研究摘要咖啡中含有多种活性物质，具有抗菌、抗病毒、消除疲劳、抗氧化等活性。绿原酸是咖啡豆中主要的活性物质之一，传统的分离一般是通过柱色谱分离方法得到，但是这些方法工艺复杂、成本高、产率低且耗时。为了探究一种简单、高效分离绿原酸的方法，本文研究了浸膏提取方法，绿原酸萃取过程中的pH值、萃取溶剂、活性炭脱色处理方法及用量，另外还研究了绿原酸重结晶的最佳溶剂体系，实验结果如下：咖啡豆用95%的乙醇溶液，在28℃下，超声波辅助提取5次，1h/次，浸膏得率为23.3%。得到的浸膏分散在水中先用石油醚反复萃取除去部分小极性杂质，然后调节水相溶液pH=3，用乙酸乙酯与乙醇的混合溶剂（10:1，V/V）萃取5次，有机相用活性炭处理3次，经浓缩后可得到绿原酸粗品。绿原酸粗品在乙酸乙酯与甲醇的混合溶剂中反复重结晶，得到的绿原酸纯度至98.8%。该方法工艺简单、高效，便于绿原酸工业生产。另外，采用了高速逆流色谱方法对咖啡豆乙酸乙酯部位的绿原酸进行分离，得到的最佳分离条件为：以甲醇-乙酸乙酯-硫酸铵-去离子水（3.2:3:1:7，V/V/m/V）为溶剂体系，下相作为流动相，上相作为固定相，在转速为800rap·min-1，分离温度为25℃，流动相速度为2mL·min-1的条件下进行分离。绿原酸保留时间为236~296min。采用了三种体外抗氧化活性的评价方法（清除DPPH自由基能力、还原Fe3+能力、清除一氧化氮自由基能力）研究了咖啡豆不同提取温度、烘焙温度及时间对咖啡豆抗氧化活性的影响，结果表明，咖啡豆经不同温度烘焙得到提取物抗氧化活性有明显差异，在150℃下烘焙1h得到的提取物抗氧化活性最好。对咖啡豆提取物水分散提取萃取得到的石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相、水相4个不同极性部位的抗氧化活性研究结果表明，不同部位抗氧化能力有较大差别，乙酸乙酯相与正丁醇相的抗氧化活性较高，且明显高于石油醚相和水相的抗氧化活性。关键词：绿咖啡豆分离绿原酸高速逆流色谱抗氧化活性SEPARATIONOFCHLOROGENICACIDFROMGREENCOFFEEBEANSANDTHEEXTRACTANTIOXIDANTACTIVITYINVITROABSTRACTCoffeecontainsvariousactivecompounds,andshowedtopossessantibacterial,antiviral,allayingtiredness,antioxidantactivities,etc.ChlorogenicacidisoneofthemostimportantactivecompoundsinGreencoffeebeans,whichwasnormallyobtainedbycolumnchromatographyintraditionalmethods.Inordertoexplorepreparationofchlorogenicacid,aneffectiveandsimplemethodwasdevelopedinourworks.EffectsofpHvalue,extractionsolvent,dosageofactivatedcarbonanddecolorizationonpurificationofchlorogenicacidfromcoffeebeanwasinvestigated,theresultswereshowedfollowing:Coffeewasextractedwith95%ethanolbyultrasonic-assistedmethodat28℃in1hourforfivetimestogiveextractresiduein23.3%yield.Thisresiduewasdispersedinwaterandextractedwithpetroleumetherrepeatedly,thenaqueousphasewasextractedrepeatedlybymixedsolvent(ethylacetate:ethanol=10:1,V/V)inpH3toofferlightphasesolution.Thislightphasesolutionwastreatedwithactivatedcarbon3times(dosageofactivatedcarbonwas0.01g·mL-1),andthenconcentratedtogivecrudechlorogenicacid.Thecrudechlorogenicacidwascrystalizedinethylacetate-ethanolandethylacetae-metholsystem