双链DNA中的尿嘧啶核苷酸基板是一个ppt课件.pptVIP

* 细菌耐药与抗菌药物的合理应用施光峰上海复旦大学人寿保险基本法宣导部经理基本法课标研教材是集体备课的主要内容是高效课堂的基础高校基建管理相关法规培训七年级生物下册第七章第一节分析人类活动破坏生态环境的实例期权定价与动态无套利 细菌耐药与抗菌药物的合理应用施光峰上海复旦大学人寿保险基本法宣导部经理基本法课标研教材是集体备课的主要内容是高效课堂的基础高校基建管理相关法规培训七年级生物下册第七章第一节分析人类活动破坏生态环境的实例期权定价与动态无套利 * 双链DNA中的尿嘧啶的底物的核苷酸 切口在人体细胞的修复途径 胞嘧啶：尿嘧啶的水解脱氨生成一个高度突变的DNA碱基病变被认为是一个主要的在活的有机体的自发突变的来源。 切口修复途径：这个新的修复功能的AP核酸内切酶在古细菌和人类进化上保守的，针对DNA修复一个可能的进化起源在一个共同的DNA自发损伤机制祖先的所有形式的生命。 自发水解脱氨的胞嘧啶 DNA 中的尿嘧啶（U） 是一个恒定的细胞中的基因组不稳定性的来源。这诱变过程在高温下和在单链DNA中极大的提高。如果不修复，这些尿嘧啶残基发生C→T的转换，这是最常见的自发突变,在生物体经常被发现在人类肿瘤 人类最主要的嘌呤/嘧啶（AP）的核酸内切酶，APE1，是一种脱氧尿苷核酸内切酶，可以删除在DNA糖基化酶独立的核苷酸尿嘧啶残基 APE1切割寡核苷酸含有一个单一的U?G碱基对的双链的活动。APE1具有高亲和力的DNA含有U但切割DNA在一个极低的速率双工的MALDI-TOF MS分析反应产物表明APE1催化裂解U?G双工产生预期的DNA片段5′末端脱氧尿苷酸。 经典DNA糖基化酶—发起的BER途径提出的理论问题高效的DNA损伤的修复，因为它会产生高度遗传毒性的中间体，如AP位点和/或堵塞3′末端必须消除了额外的步骤之前启动修复合成。 在我们的实验室工作，与其他观察，确定了一种经典的误码率，核苷酸切割修复（NIR）途径，其中一个AP核酸内切酶进行切口5′到受损的碱基在DNA糖基化酶独立的方式，导致在一个自由的3′-OH基团适用于DNA聚合酶和5′悬挂损坏的核苷酸17。近红外的核酸内切酶包括大肠埃希菌NFO，酿酒酵母APN1，和人APE1可以直接切割DNA双链在链中的α-端基异构2′-脱氧核苷（αDN）或各种氧化的嘧啶启动去除通过链置换合成耦合在5′-裂解的特异性核酸内切酶皮瓣。 APE1催化脱氧尿苷核酸内切酶活性。（一）时间和一种含有一个单一的尿嘧啶DNA裂解条件依赖性残留的APE1。3 - 10 nm′[32P]–标记的30聚体的U?G双工（杜RT序列上下文）孵育15–180分钟在37°C与10 nm APE1下近红外和误码率的条件。1车道，控制你?G；2车道，但孵育140 nm和10 nm APE1 hTDG BER + Mg2 +的反应条件下。3–14车道，1但APE1孵育的BER + Mg2 +或近红外条件下。（b）各种NIR核酸内切酶和ape1-d308a突变作用向你?G双工。3 - 10 nm′[32P]–标记的30聚体的U?G，和α大?T寡核苷酸的双链（杜RT序列上下文）孵育10 nm的野生型（WT）APE1和10 nm ape1-d308a NIR下2小时或在各自的NFO和APN1数量有限的条件在37°C.箭头表示的位置为30分钟的反应缓冲液的noncleaved 31肽底物，的21聚体ape1-nir位置产品，和20个碱基的DNA糖基化酶产品的位置。 一种用于识别的寡核苷酸的近红外活性和相对单碱基损伤序列APE1效率的催化双链DNA底物裂解 1 dU-RT d(TGACTGCATAUGCATGTAGACGATGTGCAT) 11 8.5 2 dU-RT-GUG d(TGACTGCATGUGCATGTAGACGATGTGCAT) 11 11.7 3 dU22 d(CACTTCGGAUTGTGACTGATCC) 10 5.8 4 dU-DL10 d(AATTGCTATUTAGCTCCGCACGCTGGTACCCATCTCATGA) 10 11 5 dU-PP d(CATCTCATGAAATTGCTATUTAGCTCCGCACGCTGGTACC) 20 7.2 6 dU-PS d(AGCTACCATGCCTGCACGAAUTAAGCAATTCGTAATCATGGTCAT) 21 2 7 dU-DL d(AATTGCTATCTAGCTCCGCUCGCTGGTACCCATCTCATGA) 20 0 8 dU-DL-CUG d(AATTGCTATCTAGCTCCGCUGGCTGGTACCCATCTCATGA) 20 1.5 9 dU-RT20 d(GGCTGCATA