清热燥湿解毒活血方及其拆方调节人结肠癌细胞rkoplcγ1介导的信号传导研究-study on signal transduction of rko plc γ 1 mediated by qingre zaoshi jiedu huoxue recipe and its disassembled recipe.docxVIP

万方数据 万方数据 硕士学位论文原创性声明 本人所呈交的硕士学位论文，是在导师司富春教授的指导下，独立进行科学 研究工作所取得的成果。除文中已特别加以注明引用的内容外，论文中不包含任 何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的 个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律 结果由本人承担。 特此声明。 论文作者（签名）： 年 月 日 硕士学位论文使用授权声明 本人已完全了解河南中医学院有关保留、使用硕士学位论文的相关规定，同 意学校保留或向国家有关部门、机构送交本学位论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅或借阅。本人授权河南中医学院可以将本论文的全部或部分内容编入有 关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编本论文（注： 保密论文在解密后适用本授权声明）。 特此声明。 论文作者（签名）： 导师（签名）： 年 月 日 年 月 日 目录 HYPERLINK \l _bookmark1 摘要 1 HYPERLINK \l _bookmark2 前言 6 HYPERLINK \l _bookmark3 材料与方法 7 HYPERLINK \l _bookmark4 1 实验材料 7 HYPERLINK \l _bookmark5 1.1 实验对象 7 HYPERLINK \l _bookmark6 1.2 实验药品 7 HYPERLINK \l _bookmark7 1.3 主要试剂 9 HYPERLINK \l _bookmark8 2 实验方法 11 HYPERLINK \l _bookmark9 2.1 药物制备 11 HYPERLINK \l _bookmark10 2.2 细胞培养 12 HYPERLINK \l _bookmark11 2.3 用 MTT 比色法检测清热燥湿解毒活血方及其拆方对 RKO 细胞抑制的量效 HYPERLINK \l _bookmark11 和时效关系 13 HYPERLINK \l _bookmark12 2.4 清热燥湿解毒活血方及其拆方对结肠癌细胞 RKO 周期的影响 15 HYPERLINK \l _bookmark13 2.5 Western-blot 法检测各治法组对细胞 RKO 蛋白表达影响情况 16 HYPERLINK \l _bookmark14 2.6 倒置显微镜下观察不同治法组对 RKO 细胞形态的影响 21 HYPERLINK \l _bookmark15 2.7 统计与分析 21 HYPERLINK \l _bookmark16 结 果 22 HYPERLINK \l _bookmark17 讨 论 36 HYPERLINK \l _bookmark18 结 论 40 HYPERLINK \l _bookmark19 参考文献 41 HYPERLINK \l _bookmark20 致 谢 44 HYPERLINK \l _bookmark21 附录 1 综述 45 HYPERLINK \l _bookmark22 附录 2 在校期间论文论著和科研情况 50 HYPERLINK \l _bookmark23 附录 3 清热燥湿解毒活血方及其拆方对人结肠癌细胞 RKO 细胞形态的影响 ... 51 HYPERLINK \l _bookmark24 附录 4 清热燥湿解毒活血方及其拆方对人结肠癌细胞 RKO 细胞周期的影响 ... 54 摘要 摘要 目的： 从临床治疗结肠癌常用的中药中筛选出抑制人结肠癌细胞生长的有效中药组 成方剂，观察该方对结肠癌细胞的抑制作用，探讨清热燥湿解毒活血方及其拆方 对结肠癌的作用机制和中医病机,为结肠癌治疗提供有效的中医方剂。 方法： 对1979年6月～2014年3月中国期刊数据库（CNKI）收录的中医诊治结肠癌的 文献，通过频度分析总结出250味中药作为初筛的具体药物，用95%乙醇浸泡一周， 第7天开始制备中药醇提物，以 100μg/ml药物浓度处理人结肠癌RKO细胞，倒置 显微镜下观察结肠癌细胞RKO的形态学变化，48小时后，运用MTT比色法筛选出对 结肠癌RKO细胞有明显抑制作用的药物，用正交实验设计选出最佳组合药物并组成 有 效 方 剂 ， 流 式 细 胞 术 观 察 该 方 及 其 拆 方 对 RKO细 胞 周 期 的 作 用 ， 并 用 Western blot方法分析该方及其拆方对RKO细胞PLCγ1介导的信号蛋白表达的影响，探讨结 肠癌发生的中医病机与RKO生长信号转导的关系，寻找治疗结肠癌的有效方药。 结果： 1 清热燥湿解毒活血方及拆方对结肠