纳米雄黄制备及其诱导mcf-7细胞凋亡 研究-preparation of realgar nanoparticles and its induction of mcf - 7 cell apoptosis.docx

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纳米雄黄制备及其诱导mcf-7细胞凋亡 研究-preparation of realgar nanoparticles and its induction of mcf - 7 cell apoptosis

湖北中医药大学学位论文原创性声明本人声明:所呈交的学位论文是在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了论文中特别加以标注和致谢的地方外,本论文不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得湖北中医药大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出贡献的个人和集体,均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:年月日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解湖北中医药大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全部或部份内容,可以采用复印、缩印或其他手段保留学位论文;学校可以根据国家或湖北省有关部门的规定送交学位论文。同意《中国优秀博硕士论文全文数据库出版章程》的内容。同意授权中国科学技术信息研究所将本人学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。(保密论文在解密后遵守此规定)论文作者签名:导师签名:年月日目录中文摘要IABSTRACTIII英文缩略语表V前言1第一章纳米雄黄的制备31实验材料31.1仪器31.2药材32实验方法32.1纳米雄黄粉体的制备32.2雄黄粉体粒径的测定及表观形貌的观察42.3不同球磨时间下雄黄粉体中As2O3含量测定43实验结果43.1不同球磨时间对雄黄粉体粒径的影响43.2不同球磨时间下雄黄粉体的电镜照片53.3不同球磨时间对雄黄粉体As2O3含量的影响74讨论8第二章纳米雄黄的炮制纯化101实验材料101.1仪器101.2药材101.3试剂101.4各种溶液的配制112实验方法122.1不同炮制品的制备122.2各炮制品得率及残渣重量的测定122.3纳米雄黄生品及各炮制品的粒径测定及表观形貌的观察122.4纳米雄黄生品及各炮制品中As2S2含量的测定122.5纳米雄黄生品及各炮制品中As2O3含量的测定143实验结果163.1各炮制品得率及残渣重量的测定163.2纳米雄黄生品及各炮制品的粒径测定及表观形貌的观察163.3纳米雄黄生品及各炮制品中的As2S2与As2O3含量测定184讨论184.1实验过程中需注意的操作点184.2纳米雄黄炮制的原因及原理194.3碱水飞品中的As2S2与As2O3的含量异常的原因分析194.4酸水飞法为最佳炮制方法的原因20第三章纳米雄黄对MCF-7细胞增殖抑制的作用211实验材料211.1仪器211.2药材211.3试剂211.4细胞株211.5各种试液的配制222实验方法222.1细胞的复苏222.2细胞的培养与传代222.3细胞的冻存232.4MTT试验233实验结果233.1CR在不同药物浓度不同作用时间下对MCF-7细胞增殖的抑制作用233.2NRP在不同药物浓度不同作用时间下对MCF-7细胞增殖的抑制作用263.3NRPP在不同药物浓度不同作用时间下对MCF-7细胞增殖的抑制作用283.4不同药物在不同药物浓度不同作用时间下对MCF-7细胞增殖的抑制作用比较313.5不同药物在相同药物浓度相同作用时间下对MCF-7细胞增殖的抑制作用比较343.6各药物对MCF-7细胞的IC50值比较354讨论35第四章纳米雄黄对MCF-7细胞凋亡的影响371实验材料371.1仪器371.2药品与试剂371.3试药的配制372实验方法382.1Hoechst33258染色法检测细胞形态变化382.2PI单染法检测细胞周期分布382.3AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率393实验结果403.1MCF-7细胞形态的观察403.2PI检测MCF-7细胞周期分布443.3AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率504讨论574.1Hoechst33258染色法检测细胞形态学变化574.2PI染色法检测细胞周期分布574.3AnnexinV-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡率58第五章纳米雄黄诱导MCF-7细胞凋亡机制的研究601实验材料601.1仪器601.2药品与试剂601.3储备液的配制602实验方法612.1Rh-123染色检测线粒体膜电位的变化612.2Westernblot蛋白印迹法检测相关凋亡蛋白的表达613实验结果653.1NRPP对细胞线粒体膜电位的影响653.2相关凋亡蛋白表达结果684讨论724.1Rh-123染色检测线粒体膜电位变化724.2Westernblot蛋白印迹法检测相关凋亡蛋白的表达72结语与创新77附录78一、攻读硕士学位期间已发表及待发表论文78二、文献综述791纳米雄黄的制备802雄黄的炮制803雄黄抗肿瘤机制研究方法82参考文献84致谢90中文摘要雄黄为硫化物类矿物雄黄族雄黄,是一种我国的传统矿物类中药。本论文采用高能球磨法制备纳米雄黄生品(RealgarNanopartic

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