农杆菌介导t-dna转化黑曲霉的初步研究.pdfVIP

目录 目录 第一章绪论…………………………………………………………………………………．1 1．1丝状真菌概述…………………………………………………………………………．．1 1．2真菌遗传转化…………………………………………………………………………．．2 1．2．1CaCl：／PEG介导法……………………………………………………………………．2 1．2．2电穿孔法……………………………………………………………………………．．2 1．2．3限制性内切酶介导的转化…………………………………………………………．．2 1．2．4农杆菌介导的丝状真菌转化………………………………………………………．．3 1．2．5选择标记………………………………………………………………。……………5 1．3真菌遗传转化系统的应用……………………………………………………………．．6 1．3．1利用基因敲除的方法研究基因功能………………………………………………．．6 1．3．2利用基因插入突变、克隆相关基因………………………………………………．．6 1．3．3基因改造……………………………………………………………………………．．6 1．4黑曲霉及产酶的研究…………………………………………………………………．．7 1．4．1黑曲霉………………………………………………………………………………．．7 1．4．2木聚糖、木聚糖酶及木糖苷酶……………………………………………………．．7 1．5展望…………………………………………………………………………………………………………………．8 1．6本论文的目的与主要研究内容………………………………………………………．．8 第二章载体pBI-hph的构建……………………………………………………1l 1 2．1实验材料与仪器设备…………………………………………………………………l 1 2．1．1质粒与菌株…………………………………………………………………………1 1 2．1．2工具酶与试剂………………………………………………………………………l 2．1．3主要软件……………………………………………………………………………12 2．1．4实验仪器……………………………………………………………………………12 2．2实验方法………………………………………………………………………………12 2．2．1载体pBI—hph的构建………………………………………………………………12 2．2．2大肠杆菌的转化……………………………………………………………………14 2．2．3农杆菌的转化………………………………………………………………………14 2．3结果与讨论……………………………………………………………………………14 2．3．1 hph表达盒的获得…………………………………………………………………14 北京化工大学硕士学位论文 2．3．2载体pBI—hph的构建及验证………………………………………………………16 2．4本章小结………………………………………………………………………………l7 第三章农杆菌介导的黑曲霉转化…………………………………………………19 3．1实验材料与仪器………………………………………………………………………19 3．1．1实验质粒及菌株……………………………………………………………………19 3．1．2所用试剂……………………………………………………………………………19 3．1．3实验设备……………………………………………………………………………20 3．2实验方法………………………………………………………………………………20 3．2．1潮霉素B及头孢噻肟浓度的确定…………………………………………………20 3．2．2农杆菌介导的黑曲霉转化…………………………………………………………21