兔骨髓间充质干细胞复合小肠粘膜下层(sis)构建组织工程化阴道模型的实验研究.pdfVIP

第2章兔BMSCs原代培养与诱导分化 第2章兔BMSGs原代培养与诱导分化 2．1材料 2．1．1主要试裁 DMEM．LG液体培养基 Hyclone，USA DMEM．F12液体培养基 Hyclone，USA 角朊细胞无血清培养基(K．FSM) Gibco美国 表皮生长因子(EGF) Gibco美国 胎牛血清(FBS) 北京TransGenBiotech有限公司 磷酸盐缓冲液(PBS) 北京中杉 消化液胰蛋白酶-EDTA(0．25％)北京Solarbio 双抗青链霉素混合液(100X) 北京Solarbio D-Hank’s液 北京Solarbio 淋巴细胞分离液PereolI 北京Solarbio 四唑盐(MAX) 美国AMRESCO公司 二甲基亚砜(DMSO) 北京Solarbio 胶原酶Ⅳ SIGMA，USA 5一溴尿嘧啶(5-Brdu) 北京Solarbio公司 小鼠抗兔广谱CK单克隆抗体 武汉博士德 小鼠抗兔SMA单克隆抗体 北京中杉金桥 SP试剂盒 北京中杉金桥 DAB试剂盒 北京中杉金桥 水合氯醛 常州万盛化工 2．1．2主要液体曲配制方法 保存。 3 第2章兔BMSCs原代培养与诱导分化 的完全培养基； 兔SMCs完全培养基：DMEM／F12液体培养基90mI+FBS10mI+青链霉素混 养基； 后叶素50 p卧Ill+青链霉素混合液(100×)lml； 诱导培养基的配制： 各45ml，加FBSIOml配制，总量lOOml； 基各45ml，加FBSloml配制，总量100ml： 1．tmoi／ml的贮存液；1umol／ml 5-Brdu：lOOm∥支+32．56ml生理盐水=10 la 的工作液=lml此贮存液+9ml生理盐水。Brdu最终浓度10mol／L=100ml完全 la u 培养基+1mol的5-Brdu，即100 l工作液。全程在避光条件下操作，滤菌后 装入棕色瓶中外加黑色纸包裹，．20。C保存； 细胞冻存液：按该细胞完全培养基：DMSO=9：1配制。 2．1．3仪器设备及耗材 超净工作台 BCM一1300A，苏州安泰空气技术有限公司 倒置显微镜 0LYMPUS—CK40．Japan 光学显微镜 OLYMPUS—CK40，Japan 二氧化碳培养箱 SANYO，Japan 低速台式离心机 TDL．40B上海安亭科学仪器厂 TN一1 00B型托盘扭力天平 上海第二天平仪器厂 自动酶标仪(MultiskanAscant