绒山羊fgf5基因的序列研究及其敲除载体构建-sequence study on fg f5 gene of cashmere goat and construction of knock-out vector.docxVIP

pLox5-33, the sequences result identify that the targeting vector is totally according with the design. It provided a vector for kouck out goat. Key Words: FGF5 gene ; PCR; Goat ; Sheep ; polymorphism ; Targeting vecto ;Gene knock-out Directed by: Prof. YIN Jun Applicant for Doctor degree: Su Shaofeng (Genetics) (College of Life Sciences.Inner Mongolia Agricultural University.Hohhot 010018.China) 目 录 HYPERLINK \l _bookmark0 1 引言 1 HYPERLINK \l _bookmark1 1.1 皮肤的结构 1 1.2 毛囊的结构及特征 1 HYPERLINK \l _bookmark2 1.3 毛囊生长发育的调控分子 2 HYPERLINK \l _bookmark3 1.3.1 毛囊调控分子的主要作用 2 HYPERLINK \l _bookmark4 1.3.2 成纤维细胞生长因子(FGF) 2 HYPERLINK \l _bookmark5 1.4 基因敲除 4 HYPERLINK \l _bookmark6 1.4.1 基因敲除的基本流程 4 HYPERLINK \l _bookmark7 1.4.2 基因敲除载体的构建 4 HYPERLINK \l _bookmark8 1.4.3 敲除载体的导入 4 HYPERLINK \l _bookmark9 1.4.4 同源重组子的筛选 5 HYPERLINK \l _bookmark10 1.4.5 检测 5 HYPERLINK \l _bookmark11 1.4.6 影响基因敲除技术的因素 5 HYPERLINK \l _bookmark12 1.4.7 提高基因敲除效率的途径 6 HYPERLINK \l _bookmark13 1.4.8 基因敲除技术的应用 6 HYPERLINK \l _bookmark14 1.5 本项目的研究的意义 7 HYPERLINK \l _bookmark15 2 实验一、FGF5 启动子、第一外显子、第一内含子片段的扩增及序列分析 8 HYPERLINK \l _bookmark16 2.1 材料 8 HYPERLINK \l _bookmark17 2.1.1 实验动物及其血液的采集 8 HYPERLINK \l _bookmark18 2.1.2 常用试剂及缓冲液配制 8 HYPERLINK \l _bookmark19 2.1.3 主要仪器设备及耗材 9 HYPERLINK \l _bookmark20 2.2 实验方法与步骤 9 HYPERLINK \l _bookmark21 2.2.1 基因组 DNA 的提取 9 HYPERLINK \l _bookmark22 2.2.2 1.6KB、9.0KBFGF5 基因的克隆测序 9 HYPERLINK \l _bookmark23 2.2.3 1.8KB、2.4KB、4.5KBFGF5 基因的克隆测序 12 HYPERLINK \l _bookmark24 2.3 结果与分析 13 HYPERLINK \l _bookmark25 2.3.1 模板 DNA 的提取结果 13 HYPERLINK \l _bookmark26 2.3.2 1.6KB、9.0KB FGF5 基因的克隆测序 14 HYPERLINK \l _bookmark27 2.3.3 1.8KB、2.4KB、4.5KBFGF5 基因的克隆测序 16 HYPERLINK \l _bookmark28 2.3.4 FGF 启动子、第一外显子、第一内含子、第二外显子序列的拼接 16 2.3.5 绒山羊 FGF5 基因的第一内含子序列与人、牛基因组序列的比对 20 HYPERLINK \l _bookmark29 2.4 讨论 21 HYPERLINK \l _bookmark30 3 实验二、FGF5 基因的 CDS 区克隆及多态性分析 22 HYPERLINK \l _bookmark31 3.1 材料 21 HYPERLINK \l _bookmark32 3.1.1 实验动物及其