砷对大鼠海马ache nos及海马区c-fos蛋白表达和细胞凋亡的影响-effects of arsenic on ache nos and c - fos protein expression and apoptosis in hippocampus of rats.docxVIP

砷对大鼠海马AChE、NOS及海马区c-fos蛋白表达和细胞凋亡的影响劳动卫生与环境卫生学研究生：余堃导师：周华芳张华摘要目的：研究砷对大鼠海马AChE、NOS及海马区c-fos蛋白表达和细胞凋亡的影响，揭示砷中毒对大脑神经毒性及其机制，探索砷中毒作用的靶细胞，为砷中毒的防治提供依据。方法：将56只SD大鼠适应性饲养一周，随机分成四组，即高、中、低剂量实验组和对照组。每组14只，雌雄各半。按大鼠体重，高、中、低剂量组每日亚砷酸钠灌胃剂量分别为20、10、5mg/kg，对照组用蒸馏水，染毒15天。大鼠处死后，急性分离大脑，一侧大脑海马测定其AChE、NOS，另一侧大脑用免疫组化法测定海马区c-fos蛋白表达及用原位末端TUNEL方法测定细胞凋亡水平。结果：各组大鼠海马AChE活性差异有统计学意义（P0.01），低剂量组大鼠海马AChE活性高于对照组，差异有统计学意义（P0.05），中、高剂量组大鼠海马AChE活性高于对照组，差异有统计学意义（P0.01）；各组大鼠海马NOS活性差异有统计学意义（P0.01），中、高剂量组大鼠海马NOS活性高于对照组，差异有统计学意义（P0.01），低剂量组大鼠海马NOS活性与对照组差异无统计学意义（P＞0.05）；随着染毒剂量的增大，大鼠海马AChE、NOS活性逐渐增加（P0.01）。各组大鼠海马区c-fos蛋白表达阳性率分别为对照组（26.07±9.60）%、低剂量组（54.86±10.35）%、中剂量组（64.18±6.23）%及高剂量组（73.69±5.52）%，实验组大鼠海马区c-fos蛋白表达阳性率均高于对照组，差异有统计学意义（P0.01），随着染毒剂量的增大，大鼠海马c-fos蛋白表达阳性率逐渐增加（P0.01）。各组大鼠海马区细胞凋亡指数分别为对照组（22.55±2.95）%、低剂量组（37.80±5.28）%、中剂量组（48.49±5.25）%及高剂量组（72.30±4.81）%，实验组海马区细胞凋亡指数均高于对照组，差异有统计学意义（P0.01），随着染毒剂量的增大，大鼠海马细胞凋亡指数逐渐增加（P0.01）。结论：砷中毒能引起大鼠海马组织AChE、NOS活性升高，诱导海马区c-fos蛋白过度表达和促使海马区细胞凋亡增加，并呈剂量-效应关系。关键字：砷海马AchENOSc-fos细胞凋亡1．前言地方性砷中毒是世界性公共卫生问题之一[1]，近年来流行病学研究表明长期、过量摄入砷可导致暴露者出现周围神经症状和中枢神经症状，砷对中枢神经系统的毒性作用越来越引起人们的重视。人群流行病学调查显示[2-5],砷可引起认知障碍、智力低下等神经行为异常,但其神经毒性作用机制并不十分清楚。长期接触高浓度无机砷不但引起皮肤过度角化及多系统、多器官的损害，而且还可导致皮肤或器官的癌变。砷能通过血脑屏障而在脑中蓄积，使大脑皮层神经结构、脑部形态异常，脑组织神经化学、脑细胞内酶发生变化、脑细胞膜损伤和细胞凋亡。长期砷暴露后产生的累积效应可能持续较长时间，即使至脱离砷暴露后的恢复期，也不能恢复其正常功能[6]。近几年在分子神经生物学研究中，即早基因（Immediateearlygenes,IEG）在神经系统的生理及病理过程中所起的重要调节作用日渐受到关注。正常情况下，IEG（主要包括c-fos，c-jun）参与神经细胞的生长、分化、信息传递、学习和记忆等生理过程。适度的c-fos表达参与DNA损伤与修复，包括细胞周期调控，对受损细胞有保护功能，而不适当的表达将干预细胞核的修复功能而使细胞走向凋亡[7]。目前对c-fos的研究有如下认识[8]：c-fos的表达与细胞凋亡有必然的联系，它终断了细胞内信号的转导而诱导凋亡，并产生死亡因子；通向凋亡信号通路中有c-fos及其它IEGs的表达；在一些情况下，c-fos产物是引导细胞死亡的基因调节通路中的一个必需成分。据资料显示[7，9]，金属汞、铅在大脑蓄积的神经毒性与c-fos，c-jun表达水平异常有关，汞、铅诱导大鼠脑组织中c-fos蛋白过度表达，与大脑海马的认知活动、学习记忆损害的毒性过程有密切的关系。并建议将IEG作为神经毒性检测和评价的效应指标，而砷也同属神经毒物，研究砷对IEG表达的影响可能会更进一步了解其神经毒性机制。细胞凋亡对维持大多数细胞生物体自身稳态起着重要的作用，细胞凋亡的失常会导致多种疾病的发生。砷不仅可以通过破坏体内氧化还原平衡，诱导自由基的大量生成引起细胞凋亡，还可以与细胞重要酶类的巯基结合使酶失活，从而引起细胞代谢紊乱，造成细胞损伤，引起细胞凋亡[10]。砷的神经毒性可能与细胞凋亡有着密切的联系[11]。乙酰胆碱（acetylcholine,ACh）是重要的神经递质，参与大脑学习记忆，对觉醒和睡眠、摄食和饮水以及体温调节等有着重要的