水稻u-box蛋白质在不同发育时期的表达分析-expression analysis of u - box protein in rice at different developmental stages.docxVIP

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  • 2018-07-31 发布于上海
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水稻u-box蛋白质在不同发育时期的表达分析-expression analysis of u - box protein in rice at different developmental stages.docx

水稻u-box蛋白质在不同发育时期的表达分析-expression analysis of u - box protein in rice at different developmental stages

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得河北农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名:签字日期:年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解河北农业大学有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权河北农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名:导师签名:签字日期:年月日签字日期:年月日学位论文作者毕业后去向:工作单位:电话:通讯地址:邮编:1引言1.1研究意义水稻(OryzasativaL.)是世界上最重要的粮食作物之一,是世界上约一半人口的主要食物,水稻也是研究作物产量、转基因、杂种优势、植物病虫害抗性和其它逆境的重要遗传材料和模式植物。系统获得基因组序列[1]、转录谱和蛋白质表达信息以及它们之间的相互关系将是了解水稻基因功能的重要步骤。对基因组序列信息的分析揭示出在水稻中有77个带有U-Box结构的基因[2],为了对水稻中U-Box蛋白质的表达有所了解,进而探讨其功能,本文针对5个U-Box蛋白质,表达纯化了预测的抗原决定簇片段,制备了相应的抗体,在获得抗体的基础上,本实验对水稻不同发育时期的蛋白质表达谱进行了初步研究,获得了蛋白质在不同发育阶段的表达信息,为了解基因的表达和功能奠定了基础。除转录谱研究外,抗体也为后续的功能相关的研究,如免疫共沉淀、ChIP-on-chip、Pull-down以及在抗病、抗逆反应中U-Box蛋白质的表达研究提供了重要资源。随着水稻基因组序列信息的阐释和转录谱数据的积累,基于抗体的蛋白质组学研究将成为现实。1.2U-Box蛋白质研究进展真核生物基因组中广泛存在U-Box基因,其编码蛋白质大部分是泛素系统中决定底物特异性识别的一种新型E3蛋白质,也有部分U-Box蛋白质属于泛素链聚集因子E4[3,4,5],近来其三维结构也已经得到了初步的研究[6],构象与RING-finger极其相似[7],两者都能促进底物蛋白泛素化降解,在细胞内异常蛋白质的降解及质量控制方面发挥着重要的作用[8],泛素化能够改变蛋白质的定位、活性和蛋白质之间的相互作用[9]。近年来,一些U-Box蛋白质的功能被初步确定[10],U-Box结构的完整性会直接影响其E3酶活性。在植物中还有报道,U-Box蛋白质与荷尔蒙调节[11]、生物与非生物防御反应[12]及植物的发育[13]相关。ARM(armadillorepeat)结构由典型的42-amino-acidleucine-richmotifs重复结构构成[14],是一种短的亮氨酸重复(leucine-rich)的修饰[15]。最初鉴定于果蝇[16]的β-连锁蛋白(β-catenin),植物中ARM结构蛋白质与哺乳动物中的β-连锁蛋白同源,ARM蛋白具有保守的疏水残基,介导了蛋白质与蛋白质的相互作用[17]。ARM蛋白质首次在果蝇中发现,随后大量的ARM蛋白质被鉴别出来,这些ARM结构的蛋白质在很多情况下利用其ARM结构与其它蛋白质相互作用,从而可以参与调节细胞的生化途径。在植物体内U-Box经常与ARM重复耦联形成U-Box/ARM结构,影响蛋白质与蛋白质互作,参与信号传导级联反应。1.2.1U-Box蛋白参与植物的防御反应Cheng[18]等对利用Avr9多肽对cf的转基因烟草进行处理,发现处理后有一个快速上调表达基因ACRE276,这个基因在受伤害的叶子里15min中内会出现变化,转基因结果证明,对ACRE276进行RNA干涉会使烟草丧失对cf抗性基因的敏感性,后来他们证明了ACRE276编码一个E3泛素连接酶,而完整的U-Box结构是其发挥活性所必须的,发现它与拟南芥的PUB17同源,转化PUB17能够使丧失cf抗性基因敏感性植株的敏感性得到恢复,而缺失E3泛素连接酶的PUB17转化则不能使敏感性得到恢复,从而证明PUB17的连接酶活性对防御信号的转到是至关重要的,同时也证明了在茄科与芸苔属中具有U-Box/ARM结构的E3泛素连接酶对于抗病和细胞死亡具有正调控的作用。U-Box蛋白质作为一种E3蛋白质,广泛的存在于酵母到人类的大量真核生物中[19]。在植物中,U-Box经常与ARM重复耦联形成U-Box/ARM结构,独立或共同与其它蛋白质发生相互作用,参与信号传导级联反应。据报道,植物U-Box蛋白质在抵抗干旱、高

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