石耳科真菌的分离培养及其生物活性的分析-isolation, culture and biological activity analysis of the fungi of the family sciaenidae.docxVIP

山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 目 录 中文摘要I abstract III 第一章 地衣共生菌藻分离培养和石耳科地衣菌藻生物活性的研究简史 1 1.石耳科地衣的分类学地位 1 2.地衣共生菌藻的分离培养的研究进展 1 3.石耳科地衣物质研究进展 2 4.石耳科地衣体及共生菌藻生物活性研究进展 2 4.1 抗菌活性 2 4.2 抗肿瘤活性 3 4.3 抗病毒活性 3 4.4 酶活性和酶抑制活性 3 4.5 抗血栓形成活性 4 4.6 抗氧化活性 4 4.7 其他活性 4 5. 两型性真菌的菌丝形态和单细胞形态转换的研究进展 4 6. 本课题研究目的和意义 5 7. 本研究的创新点 5 第二章 Umbilicaria muhlengergii 地衣共生菌的分离培养 6 1 材料和方法 6 1.1 材料 6 1.2 仪器与工具 7 1.3 培养基 7 2. 结果与讨论 9 2.1 对所获得的共生菌的描述 9 2.2 对于地衣共生菌分离培养方法的改进 9 第三章 Umbilicaria muehlengergii 共生菌的分子鉴定 11 1.材料和方法 11 1.1 材料 11 1.2 仪器与试剂 11 1.3 试剂配置 11 1.4 DNA 提取方法 13 1.4.1 共生菌菌株 DNA 提取的方法 13 1.5 分析和讨论 16 第四章：Umbilicaria muehlenbergii 发酵条件的初步探索 18 1.材料和方法 18 1.1 材料仪器和药品 18 1.2 实验方法 18 2. 实验结果 20 2.1 酵母生长曲线实验结果 20 2.2 Umbilicaria muehlenbergii 发酵条件正交实验结果 21 2.3 讨论 23 第五章 Umbiliacaria muhlenergii 抗菌活性的初步研究 24 1 实验材料和供试菌株 24 i 1.1 实验材料 24 1.2 供试菌株 24 2 实验方法 24 2.1 产物的处理方法 24 2.2 供试菌株的培养 25 2.3 阳性对照处理方法 25 2.4 抗菌实验操作流程 25 2.5 抑菌圈的测量方法 26 3 实验结果 26 4 讨论 29 第六章: Umbilicaria muehlenbergii 共生菌发酵产物抗肿瘤活性的初步研究 30 1 材料和方法 30 1.1 材料 30 1.2 实验器材 30 1.3 实验耗材 30 2 实验方法 30 2.1 肿瘤细胞的解冻复苏 30 2.2.细胞培养基的更换及既代培养 31 2.3 样品的处理及浓度梯度稀释 31 2.4 细胞的播种 32 2.5 加样 32 2.6 SRB 染色法测定抗肿瘤活性 32 3 结果和分析 33 4 分析与讨论 35 第七章 Umbilicaria muehlenbergii 地衣共生菌发酵产物抗氧化活性的研究 36 第一节：DPPH 自由基清除率的测定 36 1.1 实验样品 36 1.2 实验仪器和药品 36 1.3 实验过程 36 1.4 实验结果 37 1.5 讨论与分析 38 第二节：抗亚油酸过氧化活性的测定 38 2.1 实验材料及样品 38 2.2 实验仪器 38 2.3 实验方法和步骤 39 2.4 实验结果 39 2.5 结果分析与讨论 40 第三节 还原力活性(Reducing Power)测定 41 3.1 实验材料和样品 41 3.2 实验仪器 41 3.3 实验方法及步骤 41 3.4 实验结果 41 3.5 分析与讨论 42 第八章：Umbilicaria muehlenbergii 两型性地衣共生菌酵母型菌丝型转化条件的初步探索 研究 43 ii 第一节： 温度和光照条件的诱导 43 1.1 材料和方法 43 1.2 实验结果 44 第二节：饥饿和共生藻同培养条件的诱导 46 2.1 实验材料和方法 46 2.2 实验结果 47 2.3 讨论与分析 48 参考文献 49 致谢 53 攻读硕士期间发表的论文 54 iii 山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 中文摘要 石耳科(umbilicariaceae)是一类生境较为特殊的地衣，多生活于高海拔或高纬度地区岩 石表面，该科的一些种类具有抗肿瘤、抗微生物、抗艾滋病病毒和酶抑制剂活性。然而以 往对于石耳科地衣活性的研究仅限于地衣体和地衣内生菌方面的研究，对于石耳科地衣共 生菌的研究却未见相关报道。本文作者对