实验性抗磷脂综合征小鼠经口服重组人β2糖蛋白1后th17细胞及cd4cd25highcd127lowt细胞的变化-changes of th17 cells and cd 4 cd 25 highhcd 127 lowt cells in experimental antiphospholipid syndrome mice after oral administration of recombinant human β 2 glycopr.docxVIP

学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。本论文属于保密，在年解密后适用本授权书。不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日中文摘要目的：抗磷脂综合征，简称为APS，它是一种由抗磷脂抗体（APL）引起的自身免疫性疾病。通过大量的临床观察，它的主要症状表现为如下两个方面：一是持续不断的妊娠丢失；二是形成动静脉血栓。本实验目的是研究经口服重组人β2糖蛋白1（rhβ2-GP1）后，实验性抗磷脂综合征（EAPS）小鼠的PBMC中辅助性T细胞17（Th17）和CD4+CD25highCD127lowT细胞的变化。方法：1、用重组人β2-GP1免疫BALB/c小鼠建立EAPS模型组、用联合口服重组人β2-GP1及重组人β2-GP1免疫小鼠的方法建立耐受组。2、采用流式细胞术检测方法，分别检测EAPS模型组、口服耐受组和实验对照组三组小鼠外周血PBMC中CD4+IL-17+Th17细胞百分率和CD4+CD25highCD127lowT细胞百分率。3、应用RT-PCR方法检测各组小鼠PBMC的转录因子RORγt-mRNA的相对表达量和Foxp3mRNA的相对表达量。结果：1、采用流式细胞术检测方法，分别检测EAPS模型组、口服耐受组和实验对照组三组小鼠外周血PBMC中CD4+IL-17+Th17细胞百分比，自免疫的第1个月到第5个月，模型组与正常对照组相比小鼠PBMC中CD4+IL-17+Th17细胞百分比略有升高，具有显著差异性(p0.05)。耐受组小鼠外周血PBMC中CD4+IL-17+Th17细胞百分率在各时间段与对照组相比没有不同，差异没有显著性(p0.05)。2、免疫后第1、2、3、4、5个月，模型组小鼠PBMC的RORγtmRNA表达高于正常对照组小鼠（图2，p0.05）；耐受组小鼠PBMC的RORγt基因表达自免疫的第1个月到第5个月均低于模型组（p0.05）；自免疫的第1个月到第5个月，对耐受组与正常对照组进行比较结果没有差别（p0.05）。3、模型组在第1个月和第2个月时与对照组相比虽然没有差别(p0.05)，但从第3个月开始下降，差异开始逐渐呈现(p0.05)。在免疫的第1、2、3、4、I5个月，对照组小鼠与耐受组小鼠PBMC中CD4+CD25highCD127lowT细胞比较两者没有差别(p0.05)。4、在免疫的第1、2、3、4、5个月时对小鼠PBMC中转录因子Foxp3的相对表达量进行检测（如图4），在第1、2个月，模型组小鼠表达水平与耐受组无差异（p0.05）；第3月、4月、5月模型组与耐受组相比mRNA表达水平下降，差异具有显著性（p0.05），在第1、2、3个月时，耐受组小鼠PBMC的Foxp3基因的表达高于对照组（p0.05），4月和5月与正常对照组比较无明显差异（p0.05）；结论：1、EAPS模型组小鼠PBMC中Th17细胞的百分比及其转录因子RORγtmRNA的表达水平与对照组相比都略有升高,而通过口服重组人β2-GP1建立的耐受组小鼠的各项指标均与对照组相近,故而我们认为APS进展Th17的过度分化可能有一定的关系。2、EAPS模型组小鼠从第3个月PBMC中CD4+CD25highCD127lowT细胞百分比开始下降，而通过口服重组人β2-GP1建立的耐受组小鼠PBMC中CD4+CD25highCD127lowT细胞百分比在1月到5月与对照组相比没有差别，故而我们认为口服耐受可能通过调节调节性T细胞的分化而发挥一定的作用。关键词：口服耐受抗磷脂综合征辅助性T细胞17（Th17）RORγtCD4+CD25highCD127lowT细胞IAbstractObjective:Antiphospholipidsyndrome(APS)isanautoimmunediseasewhichiscausedbyantiphospholipidantibodies(antiphospholipidantibodies,APA),especiallyduringpregnancycancauserecurrentearlyabortion,pregna