DEPTOR―mTOR信号通路介导的自噬在多发性骨髓瘤中对破骨细胞分化的调控作用.docVIP

DEPTOR―mTOR信号通路介导的自噬在多发性骨髓瘤中对破骨细胞分化的调控作用 　　[摘要] 目的 探讨沉默RPMI-8226 DEPTOR基因表达在非接触式共培养体系下，对破骨细胞分化因子（RANKL）蛋白表达及THP-1细胞向破骨样分化的作用，并研究其可能机制。 方法 构建DEPTOR shRNA重组慢病毒载体转染RPMI-8226细胞。通过Western blot技术从蛋白水平检测RPMI-8226细胞中DEPTOR及RANKL的表达，Western blot检测自噬相关蛋白LC-3和Atg5表达。构建共培养体系，分三组：THP-1细胞单培养组、THP-1+RPMI-8226细胞组和THP-1+DEPTOR shRNA组。应用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色法检测THP-1向破骨样细胞分化过程中抗酒石酸酸性磷酸酶活性改变，应用RT-PCR法检测THP-1细胞降钙素受体（CTR）和组织蛋白酶（Cathepsin）-K mRNA表达水平。 结果 DEPTOR shRNA可明显抑制RPMI-8226细胞中DEPTOR及RANKL蛋白表达（P 0.05），DEPTOR shRNA组自噬相关蛋白LC-3和Atg5的蛋白的表达水平较阴性对照转染组及未转染组下降（P 0.05）。THP-1细胞与RPMI-8226细胞共培养条件下可诱导THP-1细胞破骨样分化，CTR和Cathe