《实时荧光定量PCR在临床医学中的应用》ppt课件.ppt

实时荧光定量PCR在临床医学中的应用;罗氏应用科学部在临床医学的整体解决方案 基因诊断 病原体测定 肿瘤诊断 基因差异表达研究 ;;PCR与基因诊断技术;荧光定量PCR技术;罗氏应用科学部整合细胞组学和基因组学的研究流程;;LightCycler? 480 广泛的应用 ;罗氏应用科学部在临床诊断的整体解决方案 基因诊断 病原体测定 定性分析 绝对定量 耐药性研究 肿瘤诊断 基因差异表达研究 ;荧光定量PCR技术的临床应用;HBV DNA检测缩短“窗口期”;荧光定量PCR方法检测HBV感染的各期;乙肝的治疗;HBsAg和HBeAg均阳性而HBV DNA阴性？;抗病毒治疗中存在的问题 ——逆转录酶催化中心YMDD变异;HBV-YMDD变异检测的临床意义;HRM的应用介绍用12 个MIRU–VNTR 位点对结核杆菌菌株进行基因分型;小结;罗氏应用科学部在临床医学的整体解决方案 基因诊断 病原体测定 肿瘤诊断 突变检测——个性化用药 甲基化 基因差异表达 ;高分辨率熔解曲线定义;HRM的应用;饱和荧光染料创新的饱和荧光染料能够识别单碱基突变, 并且不抑制PCR反应;创新的HRM染料准确区分野生型纯合子和杂合子LC480 HRM Master Mix – ResoLight Dye ;HRM技术和dHPLC的分辨率比较 dHPLC HRM;PCR产物的高分辨率熔解曲线基于基因扫描的基因分型;两种同源双链;基因扫描高分辨率熔解分析 ;LightCycler? 480 HRM 应用介绍基因扫描– 显著降低测序成本;*;凝血因子VIII的突变检测;HRM法检测KRAS基因的敏感性结果;不同的KRAS突变类型在HRM判读图谱中显示出与野生型不同的突变型的曲线;罗氏应用科学部在临床医学的整体解决方案 基因诊断 病原体测定 肿瘤研究 突变检测 甲基化检测 基因差异表达研究 ; 在一般正常的细胞中，CpG成分处于非甲基化的状态 甲基化研究对于了解基因的调控模式以及疾病的分子生物学机制具有重要 意义：发育、癌肿瘤发生、基因印迹、X 染色体失活及相关遗传性疾病 在特定条件下，譬如许多发育相关基因，在发育的特殊阶段去甲基化表达 肿瘤的DNA甲基化改变表现为总体的甲基化水平降低与启动子区CpG岛的甲基化水平升高。抑癌基因与修复基因的甲基化导致抑??基因沉默与修复基因失活; 而总体低甲基化使反转录转座子、癌基因活化和染色体不稳定 基于甲基化特定标志物的量化情况，对不同的病人进行风险水平分级 ;;High Quality Assessment of DNA Methylation in Archival Tissues from Colorectal Cancer Patients Using Quantitative High-Resolution Melting Analysis. Balic, M. et al. (2009), J. Mol. Diagn. 11, 102-108.;甲基转移酶MGMT与肿瘤预见性、个体化治疗;罗氏应用科学部在临床医学的整体解决方案 基因诊断 病原体测定 肿瘤诊断 基因差异表达研究 早期筛查 分子指纹 ;qPCR图谱作为肿瘤指纹用于早期筛查;qPCR图谱作为成神经细胞瘤指纹Predicting outcomes for children with neuroblastoma using a multigene-expression signature. Vermeulen, J. et al. (2009), Lancet Oncol. 10, 663-671.;多因子疾病治疗预后A multiplex real-time PCR method for detection of GSTM1 and GSTT1 copy numbers. Timofeeva, M. et al. (2009), Clinical Biochemistry 42, 500-509.;European Space Agency Mission 欧洲航天计划 宇航员的基因表达在太空旅行前后是否有变化？;外太空环境对免疫系统相关的基因表达的影响;RealTime ready Human GPCR Panel宇航员在进入外太空前后血样中的基因表达变化;使用RealTime ready GPCR Panel对宇航员血样的基因表达变化分析(ESA Project IMMUNO);荧光定量PCR技术的优点;