常用分子生物学技术的原理及应用（二）课件.ppt

第七章;;四 核 酸 序 列 分 析Nucleic acid sequence analysis;核酸序列分析的基本原理; (Sanger双脱氧链终止法);三、DNA自动测序 ;ABI PRISM 310型 DNA测序仪;PE 3700型DNA测序仪;DNA自动测序结果举例;五、生物大分子相互作用研究技术 The Method of Protein-protein and Protein-DNA Interaction Study;一、蛋白质相互作用研究技术;标签融合蛋白结合实验是一个基于亲和色谱原理的、分析蛋白质体外直接相互作用的方法。;标签融合蛋白沉淀实验流程示意图;（二）酵母双杂交技术的基本原理和用途;酵母双杂交系统的应用;电泳迁移率变动测定(electrophoretic mobility shift assay，EMSA)或称凝胶迁移变动实验(gel shift assay)最初用于研究DNA结合蛋白与相应DNA序列间的相互作用，可用于定性和定量分析，已经成为转录因子研究的经典方法。目前这一技术也被用于研究RNA结合蛋白和特定RNA序列间的相互作用。;;凝胶迁移实验结果图;染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay, ChIP)是目前可以研究体内DNA与蛋白质相互作用的主要方法。;染色质免疫沉淀实验流程及结果示意图;六、遗传修饰动物模型的建立及应用;转基因技术 采用基因转移技术使目的基因整合入受精卵细胞或胚胎干细胞，然后将细胞导入动物子宫，使之发育成个体。 ;核转移技术 即动物整体克隆技术，将动物体细胞核全部导入另一个体的去胞核的卵细胞内，使之发育成个体，即克隆(clone)。 ;有目的去除动物体内某种基因的技术, 称为基因剔除（gene knock-out）或基因靶向灭活(gene targeting)。;四、基因转移和基因剔除技术在医学中的应用;七、基因组学的建立及应用;人类基因组计划;基因组分类 病毒基因组 原核生物基因组 真核生物基因组;一、病毒基因组;1．通常由__DNA分子组成 2．__子结构是原核生物基因组的结构特点之一 3．基因密度__，编码区比例__；重复序列__；含有同基因； GC含量变化__。 4．非编码区主要为__序列 5．__(有或无)转座现象。 6．__DNA具有自主复制能力;一、病毒基因组;1．通常由环状双链DNA分子组成 2．操纵子结构是原核生物基因组的结构特点之一 3．基因密度高，编码区比例大；重复序列少；含有同基因； GC含量变化大 4．非编码区主要为调控序列 5．存在转座现象 6．质粒DNA具有自主复制能力;癌 症;;人类基因组计划的动议过程;;人类基因组计划的动议过程;人类基因组计划的目标;人类基因组计划的发展进程;人类基因组计划的研究策略;1998年;人类基因组计划的发展进程;人类基因组计划的发展进程;中国人类基因组计划发展进程;中国人类基因组计划研究成果;癌症基因组学;癌症基因组计划的动议过程（The Cancer Genome Atlas.TCGA）;癌症基因组计划的动议过程（The Cancer Genome Atlas.TCGA）;癌基因组特征认证中心;中国癌基因组计划发展进程;进 展;肺 癌;黑素瘤皮肤癌;;基因组“巨变”诱导癌症发生;七、转录组学的建立及应用;转录组学;转录组学实验方法; 我们正由结构基因组时代迈入功能基因组时代。随着这个功能基因组学问题的提出（后基因组时代，蛋白组学），涌现出许多功能强大的研究方法和研究工具，最突出的就是细胞蛋白质二维凝胶电泳（2-D-gel）（及相应的质谱法测蛋白分子量）和基因芯片（Genechip）技术 ;美国继开展人类基因组计划以后，于1998年正式启动基因芯片计划。（多部门参加） 多所名校（斯坦福大学、麻省理工学院、英国剑桥大学及部分国立实验室如Argonne Oakridge也参与了该项目的研究和开发。 世界大型制药公司尤其对基因芯片技术用于基因多态性、疾病相关性、基因药物开发和合成或天然药物筛选等领域感兴趣，都已建立了或正在建立自己的芯片设备和技术。而主要仍以少数几家公司为主，如Affymetrix、Brax、Hysep等。 国内目前主要如清华大学（程京）、中科院生命科学院、上海复旦大学、北京军事医学科学院、南京东南大学、西安等四十余家公司，而且可能还有一大批公司相继成立。 ;基因芯片是信息时代的产物;2. 什么是基因芯片 ;生物芯片包括基因芯片、蛋白质芯片、组织芯片。 而基因芯片中，最成功的是DNA芯片，即将无数预先设计好的寡核苷酸或cDNA在芯片上做成点阵，与样品中同源核酸分子杂交的芯片