血管内皮祖细胞（EPC）与自体骨髓干细胞移植ppt课件.pptVIP

ESC的分化诱导——简单两步法 第一步：EB形成： 采用悬浮培养法 第二步：EB的直接种植培养： 取培养第4天的EB悬液，按50-100μl/孔用量移入0.1%明胶预衬的6孔培养板中，以分化培养基培养，每1-2天换液一次，换液时以PBS或Hanks液洗去未贴壁细胞。待细胞至70%-80%融合时，进行消化传代，即为ESC-EC P1。一般5-7天传代一次，多余细胞冻存。 拟胚体的分化种植 将Day4的EB直接种植，采用分化培养基培养，6小时内即贴壁生长，24h后可见从贴壁生长的EB周围出芽样长出梭形或多角形细胞，向外放射状生长，并与周围集落融合。 EB Day4，×400 Day1，×200 Day2，×100 Day4，×100 Day9，×100 Day15，×100 分化细胞的鉴定 DiI-Ac-LDL摄取实验：P9 P9，×400 分化细胞的鉴定 DiI-Ac-LDL摄取实验：L929（阴性对照） ×400 分化细胞的鉴定 荧光双染： DiI-Ac-LDL摄取及FITC-UEA-1 P1，×400 分化细胞的鉴定 免疫组化染色：CD31 空白对照，×400 P15，×400 分化细胞的鉴定 免疫组化染色：Flk-1 空白对照，×400 P15，×400 分化细胞的鉴定 流式细胞仪检测： CD31阳性细胞比例逐渐增加，第2代（P2）时即可达71.7%~82.4%（平均76.6%），P6时则达84.8%~90.1%（平均86.1%），不断传代后最终维持在90%左右的较高水平。 P2 P6 P9 分化细胞的鉴定 透射电镜检测： 分化产生的细胞胞质内细胞器丰富，核周有散在的粗面内质网和丰富的糖原颗粒，线粒体甚为丰富。 分化细胞的鉴定 透射电镜： 细胞膜下及胞质内常见大小不等的吞饮小泡及多泡小体。 分化细胞的鉴定 透射电镜： Weibel-Palade（W-P）小体，是位于胞浆内的棒状呈束的微管，周围有单层膜包被。 结论（2） 采用简单的贴壁培养，单独采用VEGF即可成功诱导小鼠胚胎干细胞分化产生内皮样细胞。 经传代培养后，分化细胞中CD31阳性细胞可达到90%以上，纯度高。 ENDOTHELIAL PROGENITOR CELL AND AUTO BONE MARROW STEM CELL TRANSPLANTATION XUANWU HOSPITAL OF CAPITAL MEDICAL UNIVERSITY 生活家饮食保健孕期选择食用油的学问邢台市第四病院罕见护理应急预案猪气喘病综合防制技术动物营养系列理想蛋白与氨基酸模式的研究进展皮肤病的诊断包括病史体格检查和必要的实验室检查我国有关食物添加剂营养强化剂食物新资本的治理律例与标准 血管内皮祖细胞（EPC）与自体骨髓干细胞移植 首都医科大学血管外科研究所 首都医科大学宣武医院血管外科 吴英锋 谷涌泉 郭连瑞 张建 1997年Asahara等首先描述了循环于外周血中的内皮祖细胞（endothelial progenitor cell，EPC）。 应用免疫磁珠法首先从外周血分离CD34+细胞，经在纤维连接蛋白（fibronectin, Fn）预衬的培养皿培养，这些细胞转变成内皮特征细胞。 意义： （1）更正并充实了长期以来人们所认识的血管新生机制 （2）为缺血性疾病及恶性肿瘤的治疗提供了新的靶点 血管内皮祖细胞（EPC） 概念 EPC又称为血管母细胞/成血管细胞（angioblast）,是指能分化为血管内皮细胞的前体细胞，包括从血液血管干细胞(hemangioblast)到成熟内皮细胞之间的多个阶段的细胞。 换句话说，EPC是向成熟内皮细胞分化过程中的具有特殊表型和特性的过渡细胞群体。 血管内皮祖细胞（EPC） 来源（一） 普遍认为内皮细胞系与造血细胞系共同来源于中胚层的一种共同祖先细胞——血液血管干细胞 (1)胚胎发育上的时空联系：在鼠胚7.5日龄、人胚13日龄胚外造血启动，卵黄囊的胚外中胚层聚集成血岛（blood island）。位于血岛外层的细胞分化成原始的血管内皮细胞，血岛中央的细胞则变成原始的造血细胞。多个血岛腔隙相互联结成网状结构，形成原始血管床，此过程称之为血管发生(vasculogenesis) 。 (2)造血细胞与血管内皮细胞共同具有众多细胞表面标记：SCL/TAL-1、CD34、VEGFR-2、GATA-2、PECAM-1、Tie-1、Tie-2和CD133等 。 (3)某些胚胎源细胞的双系分化能力：有人用VE-cadherin从胚胎中分离到不表达CD45和Ter119的“内皮细胞”，发现该细胞可产生包括T和B淋巴细胞在内的造血细胞，证明了胚胎期内皮细胞