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2、基因表达载体的作用 a、使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代 b、同时使目的基因能表达和发挥作用 3.基因表达载体的组成: 它们有什么作用? a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 位于基因的首端,是mRNA结合位点 位于基因的末端,终止转录 检测目的基因是否导入受体细胞 ①载体与表达载体的区别:二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 ②用到的工具酶:既用到限制酶切割载体,又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接,两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键 ③切割目的基因和质粒的限制酶是同一种酶。 注意 ⑤目的基因不能单独进入受体细胞,必需以表达载体的方式携带进去。 ④目的基因首段必须有启动子,尾端必须有终止子。 ⑥目的基因单独导入受体细胞即使成功,也不能转录和翻译。 转基因植物 转基因动物: 转基因产物: 受精卵 体细胞 受精卵 微生物细胞 病毒 真核:真菌(酵母菌、霉菌等) 原核:细菌、放线菌、支原体等 微生物 4.受体细胞的选择 第四步、目的基因的表达和检测 大量的受体细胞接受不多的目的基因。处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少,必须将它从中检测出来。 将每个受体细胞单独培养形成菌落,检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落,保留有表达产物的进一步培养、研究。 无表达产物 无表达产物 有表达产物 无表达产物 (四)目的基因的表达与检测 检测 ①导入检测:目的基因是否导入受体细胞 方法—— DNA分子杂交 ②表达检测 转录检测——分子杂交 翻译检测——抗原抗体杂交 分子检测法 鉴定 抗虫鉴定 抗病鉴定 活性鉴定等 个体水平的鉴定 一、基因工程与作物育种 抗虫害的玉米 转黄瓜抗青枯病基因的甜椒 转鱼抗寒基因的番茄 获得高产、稳产和具有优良品质的农作物和具有抗逆性的作物新品种。 抗虫的基因来自苏云金杆菌。苏云金杆菌形成的伴胞晶体是一种毒性很强的蛋白晶体,能使棉铃虫等鳞翅口害虫瘫痪致死。科学家将编码这个蛋白质的基因导人作物,使作物自身具有抵御虫害的能力。 生长快、肉质好的转基因鱼(中国) 乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷) 2、基因工程与药物研制 我国生产的部分基因工程疫苗和药物 许多药品的生产是从生物组织中提取的。受材料来源限制产量有限,其价格往往十分昂贵。 微生物生长迅速,容易控制,适于大规模工业化生产。若将生物合成相应药物成分的基因导入微生物细胞内,让它们产生相应的药物,不但能解决产量问题,还能大大降低生产成本。 胰岛素从猪、牛等动物的胰腺中提取,100Kg胰腺只能提取4-5g的胰岛素,其产量之低和价格之高可想而知。 将合成的胰岛素基因导入大肠杆菌,每2000L培养液就能产生100g胰岛素!使其价格降低了50%-80%! 3、 环境保护 基因工程做成的“超级细菌”能吞食和分解多种污染环境的物质。 通常一种细菌只能分解石油中的一种烃类,用基因工程培育成功的“超级细菌”却能分解石油中的多种烃类化合物。有的还能吞食转化汞、镉等重金属,分解DDT等毒害物质。 基因诊断: 也称为DNA诊断或基因探针技术,即在DNA水平分析检测某一基因,从而对特定的疾病进行诊断。 探针制备:放射性同位素(如32P)、荧光分子等标记的DNA分子; 原 理:利用DNA分子杂交原理; 五、基因治疗曙光初照 基因探针: 基因探针就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列。它包括整个基因,或基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。 知识延伸——DNA分子杂交技术 该方法是根据碱基互补配对原则,把互补的双链DNA解开,把单股的DNA小片段用同位素、荧光分子或化学发光催化剂等进行标记,之后同被检测的DNA中的同源互补序列杂交,从而检出所要查明的DNA或基因。 基因工程及其应用 1.课本102页 2.基因工程: 又叫基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的说,就是按人们的意愿,把一种生物的某种基因提取出来,加以修饰改造,然后放到另一种生物的细胞里,定向改造生物遗传性状。 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 原理、实质 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 转基因西红柿 3.基因工程应用 转基因超级鼠 善假于物也 一、 “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 1.名称: 限制性核酸内切酶,又称限制酶。 切割是在DNA分子内部进行,所以称为内切酶。 2.来源: ① 主要从原核生物中分离纯化出来
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