慢性乙型肝炎肝脏微循环障碍的机制分析-mechanism analysis of hepatic microcirculatory disturbance in chronic hepatitis b.docxVIP

1 1 慢性乙型肝炎肝脏微循环障碍的机制研究 摘 要 目的：观察慢性乙型肝炎肝窦体视学指标的改变、肝组织超微结构的变化， 检测肝细胞凋亡率及低氧诱导因子-1α的表达，从病理组织学角度探讨慢性乙型肝 炎肝脏微循环障碍的发生机制。 方法：81 例慢性乙型肝炎患者经血清学确诊，另取 5 例正常肝组织作对照。 肝穿组织分为两部分：一部分立即置于 10%福尔马林固定（不少于 12h），石蜡包 埋，连续 4μm 切片，作 HE 染色，光镜观察，同时作肝窦体视学分析，并采用 TUNEL 法检测慢性乙型肝炎肝细胞的凋亡率和免疫组织化学染色法分析低氧诱导 因子 1α在慢性乙型肝炎肝组织中的表达情况。另一部分用 2.5%戊二醛固定，1% 四氧化锇后固定，0.1M 磷酸缓冲液清洗，梯度酒精脱水，Ep812 树脂包埋，超薄 切片机切片，醋酸铀、柠檬酸铅染色，作透射电子显微镜观察。 结果：随着慢性乙型肝炎肝组织病变程度的加重，肝窦狭窄、阻塞、扩张和 毛细血管化明显，肝窦数目逐渐减少，肝窦总面积、总周长及平均直径逐渐加大； 肝细胞凋亡率显著增加。电镜结果显示，慢性乙型肝炎患者肝窦腔被炎细胞、红 细胞、糖原等阻塞。一些肝细胞内出现脂肪空泡，细胞核固缩变形、核仁溶解， 核染色质凝集，核膜双层结构消失。部分病例线粒体肿胀扩大成圆球状。有的肝 细胞膜破裂，胞浆内物质溢出。有的肝细胞结构破坏，仅成细胞轮廓，胞浆内细 胞器消失。肝窦内皮细胞突入窦腔，细胞核体积增大变为卵圆形或不规则形，细 胞外观呈现皱褶状态。肝窦内皮细胞窗孔减少减小，细胞下基底膜形成，细胞之 间出现电子致密斑。肝星状细胞体积变小，胞质内脂滴稀少，细胞周围胶原原纤 维量明显增多。肝星状细胞逐渐转化为肌成纤维细胞。低氧诱导因子 1α在肝细胞、 肝窦内皮细胞和肝星状细胞上均有表达，表达强度及范围与肝组织病变程度呈正 相关。 结论：慢性乙型肝炎肝脏微循环障碍可能与下列因素有关：①肝脏中有效肝 窦密度减少；②肝窦毛细血管化；③肝窦内皮细胞中 WP 小体的形成；④肝细胞 凋亡与坏死增加；⑤肝星状细胞的激活；⑥低氧诱导因子-1α的异常表达。 关键词：慢性乙型肝炎；微循环障碍；肝窦内皮细胞；肝星状细胞；低氧诱导 因子 1α PAGE PAGE 2 Study on the mechanism of liver microcirculation disturbance in patients with chronic hepatitis B Abstract Objective: To explore the mechanism of liver microcirculation disturbance in patients with chronic hepatitis B(CHB) from point of view of pathohistology by observing the changes of stereology indexes of sinus hepaticus and ultrastructure of liver, and detecting apoptosis rate of liver cells and the expression of hypoxia-inducible factor 1α (HIF-1α) in liver of patients with CHB. Methods: Liver biopsy tissue were collected from 81 patients with CHB whom were final diagnosed by serology methods and 5 normal liver tissues.The liver tissues were divided to 2 parts. One of the parts was put into 10% formalin(at least 12h),then imbedded in paraffin, continuously cut sheet for 4μm, dyed by HE, observed under light microscop and to analyze stereology indexes of sinus hepaticus. The apoptosis rate of liver cells was detected by TUNEL method and expression of HIF-1αwas detected by immunohistochemistry stain. The other part was put into 2.