茄子solanum melongena l.花药离体培养及其形态发生机制的初步研究-茄子茄子花药离体培养及其形态发生机制的初步研究.docxVIP

中文摘要 摘要 本试验以3个茄子品种(渝研 一号、三月茄 、萍早秋一号)为材料.通过花药愈伤组织的 诱导、增殖和分化培养，获得了 一定数量的单倍体植株，并对小 T包子的发育动态 、愈伤组织 的分化做了组织细胞学和生理生化方面的研究。主要的工作和结果分述如下 z 1 材料的选取和即回 取不同发育期的花营，用矶和确化锦染色液染色压片镜检，选花粉发育为单核中期或单 核中晚期的花药进行离体法养 .花沓的发育形态与花粉发育时期的相关性因品种与外界条件 而异， -R2:以花尊刚刚裂开，还未开放，花冠包含在喜事片之中、呈绿臼色为宜.此时花药 *7 厘米左右。将来回来的花蕾大部分用湿纱布包裹放于温度为 5-6C冰箱中进行低温预处理， 其余部分于接种后进行常规培养(对照〉或热激处理 . 2 茄子花蕾适窒消毒方法的建立 茄子花蕾外被大量的绒毛.故花蕾的消毒是花药箱养中是基础的 一环.试验结果表明 次氯酸纳的消毒效果差，单纯氯化 霖的消毒效果也不好，最佳的消毒万法为 70%酒精预处理 30 秒后，用 0. 1%的氯化示滴加一滴吐温消毒 10-12 分钟。 3 花药愈伤组织的诱导 将茄子花药接种到培养基上对其培养的最适激素、有机物质组合、低温预处理时间 、热 激处理时间 、戴糖浓度进行筛选 。试验结果表明 ，茄子花药愈伤组织的诱 导受多种因素的 影 响。其中茄子花药愈伤组织培养的撮适激素、有机物质组合为 13+培养基中添加2，今二氯苯氧 乙酸1.0毫克，激动素。 .5毫克，水解乳蛋白 l克和谷氯联黯 500毫克 5-6C下最适低温预处 理时间为 48-72小时; 33C下最适热激处理时间为 48.....60 小时，热激处理和低温预处理的效 应没有叠加作用 3 最适.i!.糖浓度为 1升培养基中添加.i!.糖 30-40克.在各种最运条件下，渝研 一号、三月茄、萍早秋一号的愈伤诱导率分别达到了 12.00%、7.00%、25. 00%左右。 4 花药愈伤组织的分化和不定芽的生根 将诱导和增殖培养产生的具形态建成愈伤组织转到不同分化培养 基上 诱导不定芽的产 生.结果表明最适的分化培养基为l开MS培养基中添加玉米索1. 0毫克 . 。茶乙酸0.001- O. ∞5毫克，赤霉素。 5毫克以及水解乳蛋白 l克。在最适分化培养基上，渝研 一号、三月茄 、 薄早秋一号的分化率分别达到了 33.33%、24.00% 、68.89%. 随后将产生的不定芽转到 1/2MS 附加 α 茶乙酸。-0.005毫克/升 、震、糖 20克/升的生根培养基中生根良好，移栽存活率达 90% 以上。 5 单倩体植栋的鉴定和倍性变化 将培养获得的再生植株取其根尖用去壁低渗法逃行染色体的 f击性鉴定。结果显示，在鉴 定的95株花药培养植株中，单倍体 、二倍体、三倍体、四倍体及非整 倍、混倍体的比例分别 为 16.84%、54. 74% 、4.21% 、9.47%和14.74%. 但3个基因型的花培茵群体的倍性比例分布有 西南农业大学硕 士学位论文 所不同 伊 8 小袍子发育动态观察 在花药接科后的第三 5、io 、15天各取样 一次观察花药离体培养过程中小炮子的发育动 态(以萍阜秋 - 号 为研究对象) .用卡宝品红染色法分别制成花粉粒涂片，用显微镜进行细胞 学观察和显做摄影。结果显示，雄核发育的启动及多细胞花粉的形成并不要求培养基中必须 有外源;敏索存在，但外在事激素在茄子花药离休培养前期几天内对雄核发育的启动和多细胞花 粉的形成有促进作用. ep促使有更多的花粉由配 子体发育转向于包子体发育而形成多细胞花粉。 同时试验中观察到了茄子花药离体培养中花粉细胞分裂的两种途径·营养核分裂途径和花粉 均等分裂途径。 7 具形态建成愈伤组织分化的组织细胞学观察 在不定芽发生过程中(以萍早秋 一号为研究对象) .从接入具形态建成愈伤组织块起在 0、 1、3、6、9、12、15、18天时取材，用纳瓦兴氏液 III固定，爱氏苏木精染色，石蜡包埋切片， 切片厚度 10微米，显微观察照相。具形态建成愈伤组织转接到分化培养基上后，表面和内部 的具形态建成细胞逐渐形成两个分生中心，即分生细胞团和分生组织结节，以后前者发育成 了芽原基，后者发育成了根原基。 B 愈伤组织分化的生理生化指标测定: 本试验分别测定了具形态建成和不具形态建成愈伤组织分化时的多项生理生化指标(以 萍早秋一号为研究对象) :过氧化物酶同工酶港带变化、过氧化物酶活性、可溶性糖、淀粉、 蛋白质和核酸含量.从而较系统地从多角度对两类愈伤组织分化时的生理生化变化进仔了研 究.结果表明，在转入分化培养基前具形态建成与不具形态建成愈伤组织的酶谱基本相同