哮喘大鼠差异表达基因筛选及柴朴汤的干预分析-screening of differentially expressed genes in asthmatic rats and intervention analysis of chaipu decoction.docxVIP

PBSphosphatebuffersolution磷酸盐缓冲液RealTime-PCRrealtimepolymerasechainreaction实时荧光定量聚合酶链反应TPD52L1tumorproteinD52-like1癌蛋白52PBMPeripheralcircumferenceofbronchialbasementmembrane支气管基底膜周径WaiThewallareaofWithinbronchialWamThewallareaofbronchialsmoothmuscle支气管内壁面积支气管平滑肌面积WatThewallareaoftotalbronchial支气管总管壁面积XCL1*chemokine(Cmotif)ligand1趋化因子配体1注释：*表示CCL1、XCL1在趋化因子家族中属于不同亚族。2哮喘大鼠差异表达基因筛选及柴朴汤的干预研究硕士研究生刘斌导师刘鑫教授中文摘要目的利用基因芯片技术筛选哮喘大鼠及应用柴朴汤干预治疗后不同时段肺组织中异常表达的基因，阐明哮喘的发病机制及柴朴汤作用的靶基因。方法健康SD大鼠(体重150~200g)42只，随机表随机分为正常对照组与哮喘模型组及柴朴汤干预组。用卵蛋白（OVA）致敏激发建立大鼠哮喘模型。分别于2、4、8周处死大鼠收集肺泡灌洗液行炎性细胞及嗜酸性粒细胞计数，取肺组织行HE染色、病理图像分析，提取肺组织RNA行基因芯片筛选，以基因表达倍数值2.0和基因表达倍数值－2.0为阈值来确定差异表达基因，然后用GO及Pathway分析对差异表达基因进行功能分类分析。并对基因芯片结果进行实时定量PCR验证。结果1.各组大鼠肺泡灌洗液中炎性细胞分类计数对照组肺泡灌洗液中炎性细胞及嗜酸性粒细胞数均明显低于哮喘模型组，差异有显著性（P0.01）；随着激发时间的延长，哮喘模型组及柴朴汤干预组中炎性细胞及嗜酸性粒细胞数逐渐增加，差异有显著性（P0.01）；炎性细胞及嗜酸性粒细胞数在柴朴汤干预组中比哮喘模型组中均有所减少，差异有显著性（P0.01）。2.哮喘大鼠气道重塑的改变大鼠哮喘激发后二周开始出现支气管壁周围有大量炎症细胞浸润,气道平滑肌增厚,杯状细胞增生,伴黏液高分泌,胶原过度沉积，基底膜增厚；哮喘四周组与二周组相比，气道平滑肌明显增厚,气道壁更厚，差异有显著性（P0.01）；哮喘八周组与四周组相比，气道平滑肌明显增厚,管腔更狭窄，差异有显著性（P30.01）。3.各组大鼠基因芯片筛选及实时定量PCR验证从24358条表达基因谱中，筛选出在哮喘疾病的进展过程中及柴朴汤的治疗过程中持续性差异表达2倍以上的基因有13条，它们涉及哮喘的防御反应、免疫反应、细胞凋亡、神经调节等功能有关。其中发现Mal、TPD52L1等新基因参与哮喘疾病过程。对Mal、TPD52L1基因进行实时定量PCR验证，结果显示这两个基因在不同组大鼠标本中均有异常表达，且与基因芯片筛选结果表达方向一致，验证了基因芯片结果。结论1.Mal、TPD52L1基因在肺组织中异常表达，影响哮喘的病程进展。2.柴朴汤能通过上调Mal及下调TPD52L1在肺组织中的表达，从而减轻哮喘的气道炎症和重塑进程。关键词哮喘；基因芯片；柴朴汤；Mal；TPD52L14ThedifferentiallyexpressedgenesscreeninasthmaticratsandconducttheinterferentialresearchofChaiPudecoctionAbstractObjectiveToinvestigatetheabnormallyexpressedgenesbetweenasthmaticratsandChaiPudecoctioninterventiononesduringdifferenttimes.ToinvestigatethemechanismofasthmaandexploretargetgenesofChaiPudecoction.MethodsForty-twoSDrats，weight(150-200）g,wererandomlydividedintoacontrolgroup,aasthmamodelgroupandachaipudecoction-treatedgroup.Asthmaratmodelwasestablishedbysensitizationandstimulationwithalbumin(OVA)conjunctedwithAl(OH)3.Executingasthmaratsafterexcitingasthma2weeks,4weeksand8weeksrespectively,collectingbronchoalveolarlavagefluid（BA