下调前列腺干细胞抗原表达对人前列腺癌细胞pc-3m生长及侵袭转移的体内研究-in vivo study of down-regulating prostate stem cell antigen expression on growth and invasion and metastasis of human prostate cancer cell pc - 3m.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 HYPERLINK \l _bookmark0 中文摘要 1 HYPERLINK \l _bookmark1 英文摘要 4 HYPERLINK \l _bookmark2 缩略词语表7 HYPERLINK \l _bookmark3 前 言 8 HYPERLINK \l _bookmark4 材料与方法11 HYPERLINK \l _bookmark5 结 果 24 HYPERLINK \l _bookmark6 讨 论 31 HYPERLINK \l _bookmark7 结 论 35 HYPERLINK \l _bookmark8 参考文献 36 HYPERLINK \l _bookmark9 综 述 40 HYPERLINK \l _bookmark10 读学位期间发表论文相关情况 50 HYPERLINK \l _bookmark11 致 谢 51 HYPERLINK \l _bookmark12 学位论文原创性声明52 HYPERLINK \l _bookmark13 学位论文知识产权权属声明 52 HYPERLINK \l _bookmark14 关于学位论文使用授权的说明 52 中文摘要 中文摘要 万方数据 万方数据 下调前列腺干细胞抗原表达对人前列腺癌细胞 PC-3M 生长及侵袭转移的体内研究 专业：外科学（泌尿外科） 研究生：何军 导师：赵志刚 教授 中文摘要 背景 前列腺癌是老年男性常见的恶性肿瘤。我国前列腺癌的发病率呈明显上升的 趋势，且增长比欧美发达国家更为迅速，已成为泌尿外科领域一个越来越重要的 课题。前列腺癌具有侵袭性生长的生物学特性，临床上有许多患者就诊时已经有 癌的扩散转移，而相当多数局限性前列腺癌患者在以治愈为目的的根治性治疗 （根治性前列腺切除术、根治性放疗）后几乎不可避免地发生生化复发，并最终 进展为远处转移。侵袭和转移性生长目前仍然是前列腺癌患者死亡的主要原因。 因此，深入阐明前列腺癌发生侵袭和转移的分子机制，寻找新的干预靶点，为前 列腺癌的治疗提供新的途径具有重要意义。前列腺干细胞抗原（PSCA）基因是首 次从人前列腺癌异种移植瘤动物模型 LAPC-4 鼠中分离得到的一个新基因，并特 异性表达于前列腺癌组织中。近年来大量研究发现 PSCA 基因表达不仅与前列腺 癌的发生发展相关，而且与临床前列腺癌的恶性进展密切相关。我们前期体外实 验已证实利用 RNAi 技术抑制 PSCA 基因表达，可抑制 PC-3M 细胞的增殖及侵袭转 移能力。本实验进一步研究其在生物体内中的作用，通过筛选稳定沉默 PSCA 的 前列腺癌细胞株 PC-3M-PSCA(-)，将其接种在重症联合免疫缺陷（SCID）小鼠皮 下，观察 PSCA-shRNA 对移植前列腺癌生长、侵袭及转移的影响。 研究目的 观察 shRNA 介导沉默 PSCA 表达对 SCID 鼠荷人前列腺癌皮下移植瘤的影响， 从而探讨 shRNA 靶向沉默 PSCA 基因在转移性前列腺癌治疗中的意义。 1 广州医科大 广州医科大学硕士学位论文 研究内容和方法 1、利用脂质体转染法将质粒 pGPU6/GFP/Neo shRNA-PSCA 转染到内源性高表 达 PSCA 的前列腺癌 PC-3M 细胞中，荧光显微镜动态观察，G418 加压筛选单克隆 细胞株，用蛋白质印迹技术鉴定并最终筛选单克隆前列腺癌细胞株。 2、将稳定沉默 PSCA 的细胞株接种于 SCID 鼠皮下，动态观察其致瘤性及移 植瘤的生长情况，并测量肿块的长径(a)和短径(b)，按公式 V=a*b2/2 计算移植 瘤的体积，绘制移植瘤生长曲线。 3、四周后，先行 3.0T MR 扫描，再处死并解剖小鼠，肉眼观察全身组织和 器官发生粘连及转移的情况，记录各组发生转移的动物的只数、转移的脏器以及 转移灶的数量。 4、完整剥离肿瘤及分离 MRI 显示可疑转移器官，4%多聚甲醛液固定，石蜡 包埋，用于免疫组织化学分析。 结果 1、成功构建表达绿色荧光且稳定沉默 PSCA 表达的单克隆前列腺癌细胞株 PC-3M-PSCA(-)，PSCA 蛋白抑制率为（77.48±3.73）%。 2、干扰组（shRNA 组）的初始致瘤时间和完全致瘤时间较 C 组及 NC 组长； 接种细胞第 10 天，shRNA 组的成瘤率为 40%（2/5 只），较空白对照组（C 组）的 成瘤率 100%（5/5 只）、无关序列转染组（NC 组）的成瘤率 80%（4/5 只）均降 低，但三组小鼠间移植瘤的体积（8.34±3.58mm3、23.38±32.04 mm3、3.24±5.26 mm3）无明显差异（P=0.254）；第 17 天，三组小鼠全部致瘤，但 shRNA 组移植瘤