先天性长qt综合征新致病基因的分析-analysis of new pathogenic genes in congenital long qt syndrome.docxVIP

目 录 摘 要 1 ABSTRACT 5 前言 9 HYPERLINK \l _TOC_250000 第一部分 一先天性长 QT 综合征家系致病基因的排除性定位 12 材料与方法 12 结果 18 讨论 20 参考文献 22 第二部分 全基因组扫描定位致病基因及其测序分析 24 材料与方法 24 结果 30 讨论 32 参考文献 34 全文小结 36 综述 37 附录 硕士期间发表的论文 46 致 谢 47 华中科技大学硕士学位论文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 先天性长 QT 综合征新致病基因的研究 研究生： 夏忆 导 师： 金润铭 教授 华中科技大学同济医学院附属协和医院儿科 摘 要 长 QT 综 合 征 （ long-QT syndrome, LQTS ）： 又 称 复 极 延 迟 综 合 征 （ delay repolarization syndrome）。其心电图特征性表现为 QT 间期延长，伴有 T 波和（或）U 波形态上的异常，主要的临床事件为室性心律失常、晕厥甚至猝死。按有无继发因素 可将该综合征分为先天遗传性和后天获得性两类，是心源性猝死（sudden cardiac death, SCD）的主要死因之一。SCD 已是发达国家的一个主要疾病死亡原因，多数发生在老 年人群，并在尸检时发现有明显的心脏结构性病变。但每年仍有成千上万、年龄在 35 周岁以下的青年人发生心源性猝死，其中至少有 3%~53%的猝死，包括以往健康的儿 童、青少年和年轻成人在尸检后并没有发现心脏有明显的形态学异常。 已知长 QT 综合征是引起这部分病人死亡的主要原因之一。来源于美国的统计资 料表明长 QT 综合征在人群中的发病率约为 1/3000，且死亡率高，未经治疗的患者 10 年死亡率高达 50%，严重威胁着人类健康。长 QT 综合征是一组心肌细胞膜离子通道 功能异常、导致心肌细胞复极时间延长的心脏传导异常性疾病。典型的心电图特征为 QT 间期延长和尖端扭转性室性心动过速（torsades de pointes, TDP)。长 QT 综合征按 病因常可分为遗传性和获得性两种类型。获得性长 QT 综合征虽然也与遗传有关，但 主要是由于电解质紊乱、某些药物（如抗心律失常药）和心肌局部缺血等原因所导致。 临床上去除这些诱因可以起到治疗作用。而遗传性长 QT 综合征的发生机制比较复杂， 并且检测和治疗措施有限，因此一直是心律失常领域研究的焦点和热点。 目前分子遗传学研究已经发现了与该综合征相关的至少 12 个致病基因。这些基 因定位于 3，4，7，11，12，17，20 和 21 号染色体上，分别编码心肌细胞膜上的钠 通道、钾通道、钙通道和膜交换器相关蛋白。然而只有 80%左右的长 QT 综合征患者 的发病原因和机制可以用这些已知基因来解释，仍有约 20%的长 QT 综合征病人其致 病基因有待我们去发现。 我国是人口大国，有着丰富的人类基因组和遗传资源，利用这一优势，发现新的 长 QT 综合征致病基因，找到其突变规律和特点，并用于产前遗传基因筛查、产前诊 断和遗传咨询，将有效地预防重症患儿的出生，指导用药，提高该类人群的总体生活 质量。 本研究立足于基因定位克隆的策略，对来自于云南丽江的一先天性长 QT 综合征 家系进行了一系列的分子遗传学研究，旨在发现新的致病基因，研究其相关发病机制。 第一部分 一先天性长 QT 综合征家系致病基因的排除性定位 目的：对一先天性长 QT 综合征家系进行致病基因的定位研究，鉴定新的家族性 长 QT 综合征的致病基因。 方法：对该家族所有仍健在的家系成员进行病史采集、心电图及全身检查。采集 静脉血，提取基因组 DNA，选取已报道的先天性长 QT 综合征的相关致病基因位点侧 翼的微卫星标记，PCR 扩增后进行基因型分析，用连锁分析的方法进行排除，没有办 法排除的位点，进行基因外显子测序检测有无突变。 结果：这一先天性长 QT 综合征家系，追溯调查共有 15 例患者。第二代 2 例（其 中一例病人已故，无法采集血样），第三代 6 例，第四代 7 例。长 QT 综合征在该家 系中连代相传，患者中男女均有，且家族中没有近亲结婚现象，符合常染色体显性遗 传特点。微卫星标记的连锁分析证实已报道的致病基因与该家系均不连锁，测序未发 现已知致病基因的外显子区域突变。 结论：通过对此先天性长 QT 综合征家系致病基因的遗传分析研究，我们发现该 家系的致病基因不是已报道的 12 个已知基因中的任何一个，即可能存在新的致病基 因。 【关键词】先天性长 QT 综合征；连锁分析 ；致病基因 第二部分 全基因组扫描定位致病基因及其测序分析 目的：通过微