深海热液区化能自养菌caminibacter profundus氢酶在能量代谢中的作用及其对环境变化的响应特征-深海热液区化能自养菌caminibacter profundus氢酶在能量代谢中的作用及其对环境变化的响应特征.docxVIP

摘要深海热液区具有高压、寡营养、黑暗以及温度、H2含量、O2含量、盐度、pH值等急剧变化等特征。化能自养的氢细菌广泛分布于深海热液区，以溶于热液流中的H2为能源，通过氢酶催化H2的氧化获得能量，将CO2转化为简单的有机质，是深海热液生态系统的初级生产者，并在碳和能量循环中承担着重要的作用。本文以深海热液区化能自养的变形杆菌CaminibacterprofundusstrainDSMZ15016为研究对象，通过比对CaminibactermediatlanticusTB-2(AY691430)，CaminibacterhydrogeniphilusAM1116(AJ309655)，Nautilialithotrophica525(AJ404370)，Nautiliasp.Am-H(AF357197)，LebetimonasacidiphilaPd55(AB167820)5种深海热液区化能自养菌氢酶类型I的大亚基（hynL）基因序列，设计引物，克隆了类型INiFe氢酶的大亚基基因hynL序列，并进行生物信息学分析。对菌株进行电镜扫描和能谱分析，并研究了菌株生长、甲基紫晶(MV)还原氢酶活性以及hynL表达对培养时间、培养温度、H2含量、O2含量、海盐浓度和pH值变化的响应特点。结果表明，从C.profundus克隆获得864bp的hynL基因片段，其编码的氨基端序列与Lebetimonasacidiphila的相似性为99%，与热液区化能自养EpsilonproteobacteriaD类群的类型INiFe氢酶大亚基属于同一进化分支。扫描电子显微镜能谱分析表明C.profundus菌株表面有S和Fe元素沉积，提示菌株可能以氢酶催化氢气产生H+，进而产生H2S，并与Fe2+反应生成FeS沉淀。菌株的倍增时间为6h，12h进入指数生长早期，24h进入指数生长中期，72-120h处于平台期，生物量在培养72h达到最大量为4.73×107cell/mL，培养120h生物量有所下降。菌株生长的范围为25-65℃(最适为55℃)；海盐浓度0gL-1-50gL-1(最适为30gL-1)；pH1.8-7.2(最适pH为5.5)，厌氧—1.0%O2含量（最适为0.3%O2含量），氢气含量0%-80%（最适为60%）。甲基紫晶（MV）还原的氢酶活性于培养12-24h时迅速上升，在指数生长中早期（24h）达到最高，24-48h迅速下降并在72h后下降趋势趋于平缓。在培养24h时，MV还原的氢酶最大活性分别培养温度55℃，60%H2含量，0.3%O2浓度，海盐浓度30gL-1和pH5.5。HynL基因表达量于培养6-12h时迅速上升并于菌株指数生长早期（12h）达到最高，12-24h时hynL基因表达量迅速下降，48h后下降趋势趋于平缓；hynL基因最高表达量的时间提前于氢酶活性最高时的培养时间，当平台期菌体生长速度趋于零时，氢酶的表达及活性急剧下降，说明氢酶直接影响了菌株的生长繁殖。hynL最适的相对表达量为培养温度55℃，60%H2含量，0.3%O2浓度，海盐浓度30gL-1和pH5.5，与MV还原的氢酶活性及生长趋势对环境因子的响应特点呈一致趋势。论文研究结果表明：C.profundus通过调控hynL的表达，应对热液区不同环境因子的变化，进而影响能量代谢催化过程和菌株的生长繁殖。论文为揭示深海热液区的地球化学循环的分子机制以及探索生命起源与演化提供理论依据。关键词：氢酶；能量代谢；化能自养菌；Caminibacterprofundus；环境因子；深海热液区ABSTRACTHydrothermalventindeapseaisanuniqueenvironmentontheearthwhichischaracterizedwithhighpressure,oligonutrients,darkness,andwidefluctuationoftemperature,hydrogencontent,oxgencontent,salinityandpH.Hydrogenbacteriaarewidelydistributedindeep-seahydrothermalventsutilizingdissolvedH2inhydrothermalflowasenergysource.Withthisenergy,CO2isconvertedintosimpleorganicmaterials.Theyaretheprimaryproducersinthedeep-seahydrothermalecosystem,andplayanimportantroleinthecarbonandenergycycle.Hydrogenaseisaclassofredo