喜树camptotheca acuminata decne种子萌发过程差异表达蛋白质分析-喜树喜树种子萌发过程差异表达蛋白质分析.docx

目录摘要IAbstractII第1章绪论11.1喜树属植物概述11.1.1喜树生态学特性11.1.2喜树栽培技术21.2种子萌发的研究进展21.2.1种子萌发生理研究进展31.2.2种子萌发分子机理研究进展31.3植物蛋白质组学概述41.3.1蛋白质组学概念41.3.2蛋白质组学研究内容41.3.3蛋白质组学中的关键技术51.3.4差异表达蛋白质组学91.3.5蛋白质组学技术的应用101.4种子蛋白质组学研究进展101.4.1种子蛋白质101.4.2种子发育过程中蛋白质变化101.4.3种子萌发过程中蛋白质变化111.4.4环境因子对种子萌发蛋白质组的影响121.5研究目的、意义与技术路线121.5.1研究工作的目的和意义121.5.2研究工作的技术路线12第2章实验材料与方法142.1实验材料142.1.1取材142.1.2试剂142.1.3仪器152.2实验方法152.2.1萌发实验152.2.2双向电泳实验16第3章实验结果193.1喜树种子形态学特征193.2喜树成熟种子、吸胀后种子及萌发种子表达蛋白质图谱193.2.1用pH4-7范围的IPG胶条分离蛋白质193.2.2成熟种子、吸胀后种子及萌发种子表达蛋白质等电点分析213.3喜树成熟种子、吸胀后种子及萌发种子差异表达蛋白质分析233.3.1成熟种子、吸胀后种子及萌发种子匹配蛋白质等电点与分子量分析233.3.2成熟种子、吸胀后种子及萌发种子差异表达蛋白质等电点与分子量分析243.3.3成熟种子、吸胀后种子及萌发种子差异表达蛋白质斑点253.4小结48第4章讨论494.1喜树种子萌发过程中的蛋白质表达丰度变化494.2种子萌发过程中的能量代谢相关蛋白质504.3种子萌发过程中的防御相关蛋白质514.4种子萌发过程中的蛋白质命运相关蛋白质524.5种子萌发过程中的信号转导相关蛋白质52结论54参考文献55攻读硕士学位期间发表的学术论文62原创性声明、使用授权书63致谢64摘要喜树(CamptothecaacuminataDecne)是蓝果树科落叶乔木，主要分布在我国的长江流域，是我国的珍稀树种之一。该树种不仅是优良的绿化树种和建筑用材，同时因其次生代谢产物喜树碱及其衍生物具有抗癌功效，也具有很高的药用价值。近年来，由于市场对抗癌药物需求增大，人们对喜树的研究也越来越深入。种子是植物生命的开始，种子萌发的好坏直接关系到植株后续的生长发育。虽然在种子萌发研究方面已经取得了卓有成效的进展，但还未清楚的阐明其调控机理。将蛋白质组学技术应用在种子萌发研究中，为研究种子萌发过程中这些处于动态变化的代谢相关蛋白质提供了有利手段，也为深入了解种子萌发在分子水平上的调控机理奠定了基础。本文对喜树的成熟种子、吸胀后种子及萌发种子的形态学特征进行观察，同时运用蛋白质组学技术和统计学方法对种子样品进行蛋白质的分离与差异表达蛋白质分析，上升或下降1.5倍以上的蛋白质斑点被认为表达丰度发生了显著变化。本实验最终得到了173个差异表达蛋白质斑点，其中吸胀后种子与成熟种子相比，分别有94个蛋白质斑点上调和2个蛋白质斑点下调；萌发种子与成熟种子相比，分别有132个蛋白质斑点上调和15个蛋白质斑点下调。在喜树种子萌发过程中，大量蛋白质的表达丰度发生显著变化，这表明，喜树种子是通过调节各种代谢相关蛋白质表达丰度来实现萌发过程中各种生理生化反应的。关键词喜树；种子；萌发；蛋白质组学IAbstractCamptothecaacuminateisadeciduoustreebelongedtoNyssaceae.Itisoneoftheraretreespecies,andmainlydistributedinthebasinofYangtzeRiverinChina.Thisspeciesisnotonlyaqualitygreentreeandconstructionmaterial,butalsohashighlymedicinalvaluefortheanti-cancerfunctionofitssecondmetabolitecamptothecin.Inrecentyears,astheincreasingdemandsforanti-cancerdrugs,thestudyofCamptothecaacuminateismoreandmorein-depth.Seedsarethebeginningofplants’life,andseedgerminationaffectsthegrowthanddevelopmentofplants.Althoughmanyprogresseshavebeenmadeintheseedgerminationresearch,itsregulationmech