［精品］高一生物动物细胞融合与单克隆抗体人教实验版知识精讲.docVIP

高一生物动物细胞融合与单克隆抗体人教实验版 【本讲教育信息】 一. 教学内容： 动物细胞融合与单克隆抗体 二. 学习内容 本周学习动物细胞融合技术和单克隆抗体技术，掌握动物细胞融合原理、过程、融合方法，以及动物细胞融合的发展历史；掌握单克隆抗体的概念，制作方法原理，了解单克隆抗体的应用。 三. 学习重点 细胞杂交的原理过程 单克隆抗体的概念 单克隆抗体的制备方法 四. 学习难点 单克隆抗体的制备方法 五. 学习过程 动物细胞融合 概念：细胞杂交，两个或者多个动物细胞结合成一个单核细胞的过程 基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体；来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体。同种细胞在培养时2个靠在一起的细胞自发合并，称自发融合；异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合，称诱发融合。 融合机理：与植物原生质融合的基本原理相同（质膜融合） 诱导方法：物理——电刺激 化学——聚乙二醇 生物——灭活病毒（灭活仙台病毒） 仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒的被膜中有融合蛋白，可介导病毒同宿主细胞融合，也可介导细胞与细胞的融合，因此可以用紫外线灭活的此类病毒诱导细胞融合。化学和物理方法可造成膜脂分子排列的改变，去掉作用因素之后，质膜恢复原有的有序结构，在恢复过程中便可诱导相接触的细胞发生融合。 重要应用：单克隆抗体制备 突破了有性杂交的局限，使远源杂交成为可能 细胞遗传、免疫、肿瘤、生物新品种培育的重要手段 发展简史： 19世纪30年代，在肺结核、天花、水痘、麻疹等疾病患者的病理组织中观察到多核细胞。 19世纪70年代，在蛙的血细胞中也看到了多核细胞的现象，但是由于受当时科学技术发展水平的限制，人们对这一现象并没有给予足够的重视。 1958年，日本科学家岗田用灭活的仙台病毒诱导人的腹水癌细胞融合成功。后来科学家们又成功地诱导了不同种动物的体细胞融合，并且能将杂种细胞培养成活。 研究表明：很多不同种的动物细胞都能进行融合，形成杂种细胞。如人－鼠、人－兔、人－鸡、人－蛙、鼠－鸡、鼠－兔、鼠－猴等等。 具体步骤： 1. 细胞准备：分贴壁和悬浮细胞两种。前者可直接将两亲本细胞混合培养，后者需制成一定浓度的细胞悬浮液。 2. 细胞融合：加促融因子于将行融合的细胞之中，诱导融合。 3. 杂种细胞选择：利用选择性培养基等，使亲本细胞死亡，而让杂种细胞存活。 4. 杂种细胞克隆：对选出的杂种细胞进行克隆（选择与纯化），经过培养，就能获得所需要的无性繁殖系。 动物细胞融合与植物体细胞杂交的异同： 比较项目 细胞融合的原理 细胞融合的方法 诱导手段 用途 植物体细胞杂交 细胞膜的流动性 用纤维素酶、果胶酶去除细胞壁后诱导原生质体融合 离心、电刺激、振动、聚乙二醇（PEG）诱导 克服远源杂交不亲和，获得杂种植株 动物细胞融合 细胞膜的流动性 用胰蛋白酶使细胞分散后诱导细胞融合 除应用植物细胞杂交手段外，还有用灭活病毒诱导 制备单克隆抗体 单克隆抗体 概念：单个B淋巴细胞进行无性繁殖获得的细胞群，产生化学性质单一，物质特异性强的抗体 基本原理：a. 一种淋巴细胞克隆只产生一种特异性抗体 b. 细胞融合技术产生的杂交瘤细胞可以保持亲代双方的特性 c. 杂交瘤细胞的筛选，体外培养大量增殖，获得所需抗体 制备：发现：1975年 阿根廷/米尔斯坦 德国/柯勒 优点： 项目 分泌 特点 生产 单克隆抗体 杂交瘤细胞 特异性强、灵敏度高 产量高，易纯化分离 常规抗体 各淋巴B细胞 特异性差、灵敏度低 产量低，分离困难 细胞来源： B淋巴细胞 能产生特异性强抗体，在体外不能无限繁殖 骨髓瘤细胞 不产生专一性强抗体，体外能无限繁殖 诱导融合：灭活仙台病毒或聚乙二醇 制备过程： 应用：a. 理论研究中具有重要意义 b. 用于疾病的诊断、治疗、预防 单抗诊断试剂盒 简单、快速、准确 生物导弹 定向消灭癌细胞，不损伤健康细胞 【模拟试题】 一. 选择题 1. 单克隆抗体制备过程中使用的骨髓瘤细胞是一种缺陷型细胞，在含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶的培养基（HAT）中无法生长；而小鼠脾细胞是正常细胞，在HAT培养基上可正常存活。用聚乙二醇诱导细胞融合后，经过数代培养，最终可在HAT培养基上存活并能产生单克隆抗体的细胞是（ ） A. 骨髓瘤细胞之间形成的融合细胞 B. 脾细胞之间形成的融合细胞 C. 骨髓瘤细胞与脾细胞之间形成的融合细胞 D. 脾细胞 2. 研究单克隆抗体治疗癌症的思路是（ ） A. 利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞 B. 以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞 C. 抗癌物质在克隆细胞中大量合成 D. 单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合 3. 科学家用小鼠骨