小鼠精子发生过程中dysbindin-1的表达-expression of dysbindin - 1 during mouse spermatogenesis.docx

1.1实验材料271.2实验方法272结果29讨论30结论33参考文献34综述37致谢43在学期间承担/参与的科研课题与研究成果44个人简历45小鼠精子发生过程中dysbindin-1的表达摘要目的：Dysbindin-1是溶酶体相关细胞器生物发生复合体-1（BiogenesisofLysosome-relatedOrganellesComplex-1,BLOC-1）的一个亚基，在多种溶酶体相关细胞器（lysosome-relatedorganelles,LROs）的发生中发挥重要功能。LROs是一类有着和溶酶体相似特性的细胞器，如黑色素细胞的黑素颗粒、血小板的致密颗粒等，均来源于高尔基复合体，pH值呈酸性。此外，LROs还有一些细胞特异性组分，而且形态功能也因细胞不同而异。BLOC-1是由八个亚基组成的复合体，参与细胞内的囊泡形成和运输过程。精子头部的顶体被认为是一种LRO，在受精时发挥重要作用。迄今关于dysbindin-1在睾丸中的报道极少，其作用不明确。最近研究表明RNF151与dysbindin-1有直接相互作用。RNF151蛋白特异地表达在长形精子细胞中，鉴于dysbindin-1在囊泡运输中起重要作用，故推测该蛋白在顶体形成中发挥作用，但dysbindin-1是否参与顶体的形成并无实验证据。本研究探讨精子发生过程中dysbindin-1的表达及dysbindin-1对精子及顶体形态的影响，为进一步研究dysbindin-1在精子发生中的作用提供必要的形态基础。方法：取生后6-21d、28d、35d、42d和3月龄的雄性小鼠各3只，HE染色观察不同天数睾丸组织的形态结构，用westernblot检测睾丸组织dysbindin-1的表达；以dysbindin-1缺失突变的sdy小鼠为研究对象，收集附睾尾部精子，一部分用westernblot检测精子中是否有dysbindin-1的表达，另一部分制备精子涂片，HE染色显示精子形态，用异硫氰酸荧光素-豌豆凝集素（FITC-PSA）和抗精子蛋白56（sp56）单克隆抗体进行荧光染色显示顶体的结构。结果：1.不同品系成年小鼠的睾丸、附睾组织中只有dysbindin-1A，无-1C的表达。Dysbindin-1A在生后不同发育阶段小鼠睾丸组织中均有表达。在生后7d时的睾丸组织已有dysbindin-1A的表达，在14d、21d和28d有增多的趋势，到35d和42d时，又略有下降，但变化无明显的统计学意义（P0.05）。dysbindin-1A主要表达在睾丸组织细胞的胞浆中。Dysbindin-1缺失突变的sdy小鼠的精子及顶体的形态与野生型相比未见明显异常。结论：Dysbindin-1A表达于小鼠精子发生的不同时期，dysbindin-1A对精子形态维持不起关键作用。关键词：dysbindin-1；sdy小鼠；睾丸；精子；顶体Expressionofdysbindin-1duringspermatogenesisAbstractObjective:Dysbindin-1isasubunitofbiogenesisoflysosome-relatedorganellescomplex-1(BLOC-1),whichplaysanimportantroleintheformationoflysosome-relatedorganelles(LROs).LROs,suchasmelanosomesandplatelet-densegranules,arederivedfromtheGolgicomplex,similartolysosomes,withlowpHvalue.Inaddition,LROscontainsomecell-typespecificcomponentsthatareresponsibleforspecificmorphologyandfunction,BLOC-1isonecomplexcomposedofeightsubunits,involvedinintracellularvesicleformationandtransportprocess.AcrosomeiscategorizedasaLROexistingontheheadofspermatozoa,andplaysanimportantpartinfertilization.Sofarthefunctionofdysbindin-1inthetestisisunclear.RecentstudyhasshownthatRNF151hasadirectinteractionwithdysbindin-1.RNF151isspecificallyexpressedinelongatedsperma