通络方对d-galn诱导的急性肝衰竭大鼠肝损伤的影响及机制研究-effects of tongluo recipe on liver injury induced by d - galn in rats with acute liver failure and its mechanism.docxVIP

成都中医药大学硕士学位论文 成都中医药大学硕士学位论文 万方数据 万方数据 中文摘要 目的：观察复方“通络方”对 ALF 模型大鼠大鼠生化、生存时间、病理、TLR4、 NF-κ B、HMGBI、Caspase-3 等指标的变化情况，探讨 ALF 肝损伤的病机及作用机理。 方法：采用随机对照的方法，以健康的 SD 大鼠为研究对象，大鼠随机分 4 组： 空白（B）组、模型(M)组、美能(P)组、通络方组(TLP），大鼠腹腔注射 D-GalN 复制 急性肝衰竭模型，美能组给予同体积的美能混悬液（15.6mg／kg／d），通络方组给予 中药混悬液液（29.77／kg／d）每天 1 次。观察造模后 96h 的存活数量及生存时间， 采用全自动生化分析法测定大鼠血清 ALT、AST、TBil、ALB 及 CHE 水平。采用全自动 分析法测定大鼠血浆 PT 水平。采用 PCR 法检测肝组织中 TLR4 mRNA、NF-κBmRNA、HMGBl mRNA、Caspase-3 mRNA 的表达情况。 结果 1、生存率 造模后 96h，模型组死亡 10 例，死亡率为 66.7％，美能组死亡 8 例， 死亡率为 53.3％，通络方组死亡 7 例,死亡率 46.7％，差异无统计学意义(P0.05)。 模型组、美能组、通络方组平均生存时间次为 63.5、71.8、83.8h；通络方组累积生 存率高于模型组(P0.05)，但是美能组与模型组、通络方组差异均无统计学意义 (P0.05)。 2. 血清中 ALT、AST 水平变化情况 对比空白组，模型组、美能组、通络方组大鼠的血清中的 ALT、AST 水平是明显 升高的，与模型组比较，美能组、通络方组大鼠的血清中的 ALT、AST 显著降低，与美 能组比较，通络方组大鼠的血清中的 ALT、AST 显著降低，差异均有统计学意义 (P0.05)。 3、血清中 TBiL 水平变化情况 对比空白组，模型组、美能组、通络方组大鼠的血清中的 TBiL 明显升高，与模 型组比较，美能组、通络方组大鼠的血清中的 TBIL 显著降低，差异均有统计学意义 (P0.05)。但通络方组与美能组鼠的血清中的 TBIL 比较差异无统计学意义（P0.05）。 4、血清中 ALB、CHE、PT 水平变化情况 对比空白组，模型组、美能组及通络方组血清 ALB、CHE 明显降低，而 PT 明显延 1 长，差异有统计学意义(P0.05)，与模型组比较，通络方组的 ALB、CHE、PT 明显改善， 差异有统计学意义(P0.05)。 5、大鼠肝组织 TLR4 mRNA 表达的相对含量 与空白组比较，模型组大鼠肝组织 中的 TLR4 mRNA 表达明显升高，差异有统计学意义(P0.05)；与模型组大鼠比较，美 能组及通络方组 TLR4mRNA 表达量显著减少，且通络方组下降的幅度较大，差异均有统 计学意义(P0.05)。 6、大鼠肝组织 NF-κB mRNA 表达的相对含量 模型组大鼠肝组织中的 NF-κB mRNA 表达明显升高，差异有统计学意义(P0.05)；与模型组大鼠比较，美能组及通络 方组 NF-κ B mRNA 表达量显著减少，且通络方组下降的幅度更大，差异均有统计学意 义(P0.05)。 7、大鼠肝组织 HMGB1 mRNA 表达的相对含量 与空白组大鼠比较，模型组大鼠肝 组织中的 HMGBl mRNA 表达明显升高，差异有统计学意义(P0.05)；与模型组大鼠比较， 美能组及通络方组 HMGB1 mRNA 表达量显著减少，且通络方组下降的幅度更大，差异均 有统计学意义(P0.05)。 8、大鼠肝组织 casepase-3 mRNA 表达的相对含量 与空白组大鼠比较，模型组 大鼠肝组织中的 casepase-3 mRNA 表达明显升高，差异有统计学意义(P0.05)；与模 型组大鼠比较，美能组及通络方组 Casepase-3 mRNA 表达量显著减少，且通络方组下 降的幅度更大，差异均有统计学意义(P0.05)。 结论 通络方能够显著增加急性肝衰竭大鼠的生存时间及生存率，改善大鼠的肝 功能，促进凝血功能的修复，促进肝脏细胞的再生。另外一方面通过基因实验表明， 通络方能够通过下调肝组织 TLR4 表达，降低肝组织 HMGBI 表达水平,阻断 TLR4／NF- κ B 信号通路，减少前炎症性细胞因子的表达，下调 Caspase-3mRNA，可抑制肝细胞 的凋亡，促进肝细胞的再生。 关键词 通络方；急性肝衰竭；Toll 样受体-4； 高迁移率族蛋白（HMGB1 ）； 核因子κB (N F-κB ) 。 2 ABSTRACT Objective To discuss mechanisms of Tongluo Decoction(TLP) agai