AEG―1P16KI―67蛋白在宫颈癌前病变中表达与临床意义.doc

AEG―1P16KI―67蛋白在宫颈癌前病变中表达与临床意义 　　[摘要]目的：探讨AEG-1、P16、KT-67蛋白在宫颈癌前病变中的表达与临床意义。方法：2008年2月至2015年9月选择在我院诊治的宫颈癌前病变患者98例作为癌前病变组，同期选择宫颈癌患者98例作为宫颈癌组和98例健康体检人作为对照组，取三组的宫颈样本都进行AEG-1、P16、KT-67蛋白表达的免疫组化分析，并调查了临床资料进行相关性分析。结果：AEG-1、P16、KT-67蛋白在宫颈癌组的阳性表达率分别为80.0%、93.9%和92.9%，而癌前病变组为57.1%、50.0%和57.1%，在对照组为3.1%、2.0%和4.1%，三组间对比差异有统计学意义（P0.05）。AEG-1、P16、KT-67蛋白的阳性表达与宫颈癌前病变的年龄、疾病类型、HPV感染等病理参数对比差异有统计学意义（P0.05）。直线相关性显示AEG-1、P16、KT-67蛋白表达都呈现两两正向相关性（P0.05）。结论：AEG-1、P16、KT-67蛋白在宫颈癌前病变中都呈现高表达状况，且与临床病理特征存在相关性，三者可互相作用影响宫颈癌前病变的发展状况。 　　[关键词]AEG-1；P16；KI-67；宫颈癌前病变；相关性 　　宫颈癌是女性最为常见恶性肿瘤之一，我国当前宫颈癌的发生率逐渐增高，且呈现年轻化趋势。宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）为常见的宫颈癌前病变，不过发展为宫颈癌的时间比较长，一般在15年左右，在这个时间段可以对宫颈上皮内瘤变进行有效诊断，从而预防宫颈癌的发生。星型胶质细胞上调基因-1（Astrocyte elevated gene-1，AEG-1）与肿瘤的侵袭转移，血管生成及化疗耐药密切相关，可能是多种肿瘤的一个重要的潜在预后指标。原发肿瘤因子-16（premature tumor-16，P16）基因为一种细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制剂，可直接参与细胞周期调控，在宫颈癌及癌前病变中p16基因主要表现为过表达。细胞增殖核抗原一67（nuclcar-associated antigen KT-67）可能是??DNA复制提供场所的核基质及染色体支架的一种组分，可以用来识别生长期的正常细胞和肿瘤细胞，可参不驱动细胞周期的调控网络。肿瘤恶性程度越高，KT-67蛋白表达水平越高，肿瘤细胞增殖越快。本文具体探讨了AEG-1、P16、KT-67蛋白在宫颈癌前病变中的表达与临床意义，现报道如下。 　　1.资料与方法 　　1.1研究对象 　　2008年2月至2015年9月选择在我院诊治的宫颈癌前病变患者98例作为癌前病变组，同期选择宫颈癌患者98例作为宫颈癌组和98例健康体检人作为对照组，纳入标准：年龄20～70岁；癌前病变与宫颈癌都得到病理证实；均未行放疗、化疗及免疫治疗；知情同意本研究且得到医院伦理委员会的批准。排除标准：有免疫缺陷疾病；既往有宫颈病变史。癌前病变组中年龄最小35岁，最大68岁，平均年龄（61.34±4.52）岁；平均体重指数为（21.47±2.44）kg/m2；疾病类型：CIN I型40例，CINⅡ型40例，CINⅢ型18例。宫颈癌组中年龄最小42岁，最大69岁，平均年龄（60.67±3.18）岁；平均体重指数（21.22±3.19）kg/m2；病理类型：鳞癌58例，腺癌40例；临床分期：Ⅰ期44例，Ⅱ期30例，Ⅲ期24例。而对照组中年龄最小22岁，最大68岁，平均年龄（45.67±4.19）岁；平均体重指数为（21.89±2.22）kg/m2。 　　1.2免疫组化方法 　　鼠抗人AEG-1单克隆抗体（即用型抗体，批号TA803710）购自RD公司，鼠抗人P16单克隆抗体（即用型抗体，批号ZM-0205）购自博士得生物有限公司，鼠抗人KT-67单克隆抗体（即用型抗体，批号ST-0910）购自福建迈新生物技术有限公司。 　　DAB显色试剂盒购自福建迈新生物技术有限公司（生产批号，免疫组化染色试剂盒购自于北京中杉金桥生物技术有限公司（生产批号。采用Envision二步法检测AEG-1、P16、KT-67蛋白的表达情况，在免疫组化过程中，选择经HE染色证实的宫颈组织石蜡块，3um石蜡切片，放置于载玻片，60℃烤片4h；切片经二甲苯脱蜡2次，依次梯度酒精后充分水洗；进行微波处理修复抗原，蒸馏水冲洗，5min×3次；滴加50uL 3%H2O2溶液处理15min，以阻断内源性迪氧化物酶，PBS冲洗，5min×3次；滴加50uL第一抗体（AEG-1、P16、KT-67）工作液，4℃孵育12h，PBS冲洗，5min×3次；滴加50txL第二抗体工作液，25℃