AGR2Lgr5在结直肠癌中表达及其临床意义.doc

AGR2Lgr5在结直肠癌中表达及其临床意义 　　[摘要] 目的 探讨AGR2和Lgr5在人CRC中表达及其与临床病理特征的关系，评价二者联合检测对CRC诊断的意义。 方法 采用免疫组化SABC法检测70例CRC组织和20例癌旁正常组织中AGR2和Lgr5的表达情况。结果 ①CRC组织中AGR2阳性表达率较癌旁正常组织显著性增高（68.57%、25.00%，P?0.01）。在CRC组织中，AGR2的阳性表达率与肿瘤分化程度与淋巴结转移呈显著相关（P?0.05）。②CRC组织中Lgr5阳性表达率较癌旁正常组织显著性增高（74.29%、40.00%，P?0.01）。在CRC组织中，Lgr5的阳性表达率与肿瘤分化程度、浸润深度和淋巴结转移有显著相关性（P?0.05）。③联合检测AGR2、Lgr5曲线下面积与单独检测比较，差异有统计学意义（P均?0.05）。结论 AGR2、Lgr5在CRC的发生、发展过程中发挥了重要作用，两者联合检测有助于对CRC患者肿瘤进展的判断，为CRC患者的分子诊断和治疗提供了理论支持。 　　[关键词] 结直肠肿瘤； AGR2； Lgr5； 免疫组织化学 　　[中图分类号] R735.3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2014）14-0008-04 　　近年来我国结直肠癌（colorectal cancer，CRC）发病和死亡呈逐年上升趋势[1]，发病率和死亡率明显高于世界平均水平[2]。目前从分子水平上探索CRC的发生机制、侵袭转移的分子基础已成为CRC研究的热点。人前梯度蛋白AGR2（Anterior Gradient-2，Agr2）作为人类早期阶段前后位分化的相关蛋白，是来源于非洲爪蟾蛋白XAG2的人型同系物[3]。众多研究表明，AGR2与多种肿瘤的生成和转移具有密切关系，关于AGR2对肿瘤的调控作用和机制， 已成为目前肿瘤研究领域的又一重要热点[4]。富含亮氨酸的G蛋白偶联受体（leucine-rich repeat-containing G-protein-coupled receptor 5， Lgr5）作为Wnt通路的目标基因，结合R-脊椎蛋白能够使Wnt/β-catenin信号增强， 从而参与了结肠癌等肿瘤的发生[5]。最近研究还发现[6，7]，Lgr5+干细胞可能是CRC起始细胞，并与CRC的转移、复发以及患者的预后密切相关。本研究采用免疫组化方法检测AGR2、Lgr5在CRC及癌旁正常组织中的表达情况，旨在探讨AGR2、Lgr5在CRC发生发展过程中的作用，初步评价二者联合检测对CRC临床病理诊断的意义，为CRC的分子诊断和治疗提供理论依据。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 　　收集山西医科大学第一临床医院病理科2010年1月～2011年12月间CRC患者的石蜡标本70例，同时对标本的临床病理参数进行分析，其中男28例， 女42例， 年龄29～82岁，平均年龄63.7岁；病理分型中高分化17例， 中分化38例，低分化15例；浸润未及浆膜29例，浸润至浆膜层和浆膜层外41例；无淋巴结转移者39例， 有淋巴结转移者31例。癌旁组织20例，取自上述CRC标本肿块边缘距肿块5 cm或以上正常结直肠黏膜组织石蜡标本，均经病理证实无癌浸润，其中男8例，女12例，年龄31～59岁，平均年龄45.7岁。所有CRC患者术前3个月均未行化疗或放疗检查，且除外其他消化道疾病和其他器官肿瘤病史。 　　1.2 试剂 　　兔抗人AGR2蛋白多克隆抗体购自美国的Proteintech Group Inc公司，兔抗人Lgr5单克隆抗体为Dako公司产品，SABC免疫组化试剂盒及DAB显色剂均购自武汉博士德生物公司。 　　1.3 方法 　　采用免疫组化SABC法。实验步骤按照试剂盒说明进行，切片常规脱蜡至水，枸橼酸盐高温高压修复抗原，一抗AGR2多克隆兔抗，稀释比例为1∶300，37℃孵育1h；一抗Lgr5单克隆抗体，稀释比例为1∶400，4℃过夜孵育。使用DAB显色，应用苏木精对比染色，最后显微镜下观察染色结果。 　　1.4 结果判定标准 　　AGR2蛋白染色以细胞质出现黄色或棕黄色颗粒为阳性细胞。染色评分标准按照着色强度及着色细胞数综合计算，并参照许良中和杨文涛的方法判定结果[8]。每张切片阳性细胞的染色强度按无色、浅黄色、黄色、棕黄色分别计为0、1、2、3分；阳性细胞数计分：无阳性细胞为0分、1%～10%为1分、11%～50%为2分、51%～80%为3分、≥81%为4分；以上两项的乘积0～3分为阴性，4分及以上均为阳性。（4～5分为轻度阳性，6～9分为中度阳性，10分以上为强阳性）。Lgr5蛋白染色以细胞膜和细胞质呈棕黄色颗粒为阳性。在每张切片中随机选取5个高倍