BRaf蛋白在非小细胞肺癌中表达及临床意义.docVIP

BRaf蛋白在非小细胞肺癌中表达及临床意义 　　 【摘要】 目的B?Raf蛋白表达与非小细胞肺癌发生的关系很重要,但它的表达状况尚未清楚,本试验旨在检测B?Raf蛋白在非小细胞肺癌组织和癌旁组织中的表达情况以及B?Raf蛋白与各临床病理参数的相关性。为研究非小细胞肺癌的分子靶向治疗提供更多的实验数据。 方法采集大连市不同医院诊断明确的非小细胞肺癌手术切除标本95例,其中29例标本取癌旁组织,采用免疫组化方法检测各标本中B?Raf蛋白的表达。 结果B?Raf蛋白在非小细胞肺癌组织中的高表达率为64.21%,B?Raf蛋白表达与年龄显著相关( P 0.05)。 结论非小细胞肺癌中存在B?Raf蛋白表达上调,B?Raf蛋白的表达随着年龄增长而增高。 　　 【关键词】 　　非小细胞肺癌;B?Raf蛋白 　　 　　非小细胞肺癌的治疗方法很多,近年来针对EGFR酪氨酸激酶的分子靶向治疗成为肿瘤研究的热点[1],但其临床疗效并不理想。有人提出与EGFR下游基因ras的过度表达及突变以致Ras/Raf/MEK/ERK通路的异常激活有关。但近年来国外许多学者研究发现在肺癌的发生和发展过程中,B?Raf蛋白可能独立于ras蛋白而发挥作用,故而引起了人们的关注。B?raf基因处于Erk途径的入口,作用关键,研究报导B?raf基因在多种肿瘤中存在突变,引起B?Raf蛋白的异常表达。目前B?Raf蛋白在非小细胞肺癌中的表达情况尚未清楚。本研究通过检测B?Raf蛋白在非小细胞肺癌组织和癌旁组织中的表达情况,为肺癌的预测及抗肿瘤治疗提供相关的实验依据。? 　　1 材料和方法? 　　1.1 研究对象 选取大连市不同医院诊断明确的非小细胞肺癌手术切除标本95例。男50例,女45例;年龄36~80岁,平均年龄58岁;鳞癌31例,腺癌64例;高中分化77例,低分化18例;中央型15例,周围型80例;无淋巴结转移的肿瘤50例,有淋巴结转移的肿瘤45例;Ⅰ~Ⅱ期58例,III~IV期37例。所有患者均未接受过放化疗。其中29例标本取癌旁组织。通过免疫组化方法,检测各标本中B?Raf蛋白的表达。鼠抗人B?Raf单克隆抗体:Santa Cruz Biotechnology公司;美国 SP试剂盒:福州迈新生物技术公司;DAB显色剂:北京中杉金桥生物技术公司。 　　1.2 研究方法和判断标准? 　　1.2.1 免疫组化方法 标本经4%中性甲醛固定,常规石蜡包埋,制成4 μm连续切片,行常规HE染色,选择细胞状态良好处,进行免疫组织化学染色(SP法),用已知染色阳性的肺癌切片作阳性对照,PBS取代一抗作阴性对照。 　　1.2.2 判断标准 B?Raf蛋白阳性以细胞质中出现棕黄色颗粒为阳性表达。准计数5个高倍视野或500个细胞,依阳性细胞百分比及着色强度综合计分做半定量分析,阳性细胞数量记0~4分,0%为0分;≤25%为1分;26%~50%为2分;51%~75%为3分;75%为4分。着色强度记0~3分,染色的深度以多数细胞的显色反应为准,无色为0分;淡黄色为1分;棕黄色为2分;棕褐色为3分。将两项指标的评分相加,根据总的分数分为4级,即0~1分为阴性(?);2~3分为弱阳性(+);4~5分为中度阳性(+~++);6~7分为强阳性(++~+++)。? 　　1.2.3 统计学方法 采用卡方检验。? 　　2 结果? 　　2.1 B?Raf蛋白的表达情况 B?Raf蛋白在非小细胞肺癌组织和癌旁组织中均有表达,其表达阳性率在癌与癌旁组织中分别为64.21%与34.48%,前者显著高于后者( P 0.05)见表1。 　　 　　 表1 　　2.2 非小细胞肺癌中B?Raf蛋白表达与各临床指标的关系 非小细胞肺癌中B?Raf蛋白阳性表达与年龄有显著性差异( P 0.05)见表2。? 　　 表2 　　 　　3 讨论 　　大多数非小细胞肺癌中过度表达表皮生长因子受体EGFR及其天然配体。EGFR具有酪氨酸激酶活性,EGFR激活后可激活下游Ras/Raf/MEK/ERK信号传导信号途径。近年来多种针对EGFR酪氨酸激酶的分子靶向治疗药物涌现出来,如吉非替尼等。其被用于NSCLC的二线或三线治疗,但其只能抑制肿瘤细胞的生长和转移,并不能完全消灭肿瘤细胞,一旦停药肿瘤细胞又可恢复增殖,有人提出可能与EGFR下游基因ras的过度表达及突变以致该通路的异常激活有关。但近年来raf基因与肺癌发生、发展的关系引起了人们的重视。以往的研究中,人们对raf蛋白功能的关注多集中在将其作为ras蛋白关键的效应分子来研究。自2002年起大量研究发现raf基因家族中的B?raf基因在多种肿瘤中存在体细胞错义突变,使B?Raf蛋白激活。Raf基因的上调及其蛋白的过度表达存在于非小细胞肺