4种含硫化合物对链霉菌B221固体发酵羽毛角蛋白过程影响.docVIP

4种含硫化合物对链霉菌B221固体发酵羽毛角蛋白过程影响 　　摘要：利用自行分离得到的链霉菌B221固体发酵羽毛角蛋白，设置硫酸钠、亚硫酸钠、硫代硫酸钠和二硫苏糖醇4种含硫化合物添加组，分析发酵后7 d的发酵物中角蛋白酶活力、可溶性蛋白含量以及各种含硫化合物的消长变化规律。结果表明添加的4种含硫化合物对角蛋白酶都具有激活作用，但没有显著增加发酵产物中可溶性蛋白的含量；亚硫酸盐含量、二硫键化合物含量和S-磺酸半胱氨酸类物质含量之间存在着密切的相关性，B221固体发酵角蛋白过程中存在着亚硫酸盐解作用；硫代硫酸盐含量、二硫键化合物含量、S-磺酸半胱氨酸类物质含量、巯基化合物含量之间存在着密切的相关性，B221固体发酵角蛋白过程中存在着另一种降解机制――硫代硫酸盐解作用。 　　关键词：羽毛角蛋白；降解；含硫化合物；硫解；亚硫酸盐；硫代硫酸盐 　　中图分类号： Q935文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）02-0310-04 　　收稿日期：2013-12-16 　　基金项目：国家自然科学基金（编号；江苏省科技支撑计划（编号：BE2008405）。 　　作者简介：罗蕾（1987―），女，湖南邵阳人，硕士研究生，从事应用微生物学研究。Tel：（025） 　　通信作者：王睿勇。Tel：（025）Email：wangry@nju.edu.cn。随着全球家禽养殖业的快速发展，在家禽加工处理过程中产生了大量的羽毛废弃物。据食品与农业政策研究协会（FAPRI）预测：2019年全世界鸡肉产量预计达到7 936万t，届时将产生近600万t鸡毛[1]。这些羽毛中，除了少量用于制备氨基酸、蛋白质饲料以及羽绒制品外，绝大部分都被直接丢弃到环境中，造成了大量的资源浪费，同时造成了严重的环境污染[2]。 　　羽毛的主要成分是β角蛋白，粗蛋白含量可达80%以上，半胱氨酸和胱氨酸含量更是为天然蛋白质饲料之冠。角蛋白化学结构稳定，不溶于水，也不能被胃蛋白酶、胰蛋白酶等水解[3]。传统处理羽毛角蛋白的方法是利用物理、化学水解法，但存在能耗高、环境污染严重、三废不易处理、某些必需氨基酸破坏严重、生产的羽毛粉消化率低等问题[4]。因此，利用生物技术途径来解决角蛋白的分解利用近年来越来越受关注。 　　1963年，Nickerson等从弗氏链霉菌中分离到一种酶复合物，并在发酵液中检测到大量巯基化合物，由此推论角蛋白的降解主要是由菌丝表面附着的角蛋白酶直接断裂二硫键进行的，即酶降解途径[5]。1989年Kunert在真菌石膏样小孢子菌分解角蛋白的试验中，从发酵液中检测到亚硫酸盐、硫酸盐、少量巯基化合物和S-磺酸半胱氨酸，结合相关试验证据认为该降解过程首先是亚硫酸盐裂解二硫键（即亚硫酸盐分解），然后亚硫酸分解变性的蛋白质进一步被溶液中的蛋白酶降解，亚硫酸盐分解作为微生物降解角蛋白过程中的一种非酶降解机制首次被提出[6]。Kunert用弗氏链霉菌降解角蛋白时，发酵液中未能检测到亚硫酸盐，硫酸盐含量也很低，巯基化合物却大量存在，硫代硫酸根为角蛋白中硫的主要转化形式，由此认为该菌降解角蛋白是由角蛋白酶直接还原二硫键进行的[6]。2007年朱晓飞等利用链霉菌B221液体发酵进行了羽毛角蛋白降解机制的初探，结果表明硫酸盐是角蛋白降解过程中硫元素的主要转化形式，同时在发酵液中还检测到了亚硫酸盐，其含量变化与角蛋白酶活、降解率、可溶性蛋白、巯基化合物的变化存在很强的相关性，表明亚硫酸盐分解作用在角蛋白降解中可能起到非常关键的作用[7]。2010年聂庆霁等利用地衣芽孢杆菌nju-1411-1液体发酵羽毛角蛋白，检测到硫元素以硫酸根、亚硫酸根、硫离子、硫代硫酸根、巯基化合物、二硫键化合物、半胱氨酸、胱氨酸以及S-磺酸半胱氨酸类物质等9种形态存在，其中硫酸根、亚硫酸根、硫代硫酸根和S-磺酸半胱氨酸类物质是主要形态，亚硫酸根和S-磺酸半胱氨酸类物质出现相互消长的关系，表明亚硫酸盐分解作用的存在[8]。 　　本研究利用笔者所在实验室自行筛选的链霉菌B221，研究角蛋白固体发酵过程中外源添加不同浓度的硫酸钠、亚硫酸钠、硫代硫酸钠和二硫苏糖醇等四种含硫化合物对链霉菌B221角蛋白固体发酵过程的影响，加深对链霉菌B221降解角蛋白机制的认识，旨在为生物技术方法开发利用羽毛角蛋白资源奠定基础。 　　1材料与方法 　　1.1供试材料 　　链霉菌B221，从畜禽场长年堆积羽毛等废弃物的土壤中经过富集培养和分离筛选获得。 　　基础培养基和发酵培养基[9]。 　　1.2试验方法 　　1.2.1羽毛角蛋白的固体发酵在250 mL锥形瓶中装入34 mL基础培养基，加入10 g羽毛，121 ℃灭菌20 min。冷却后