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2株番木瓜根际促生菌解磷解钾作用 　　摘要：用平板涂布、划线与固体平板-透明圈法从番木瓜根际土壤中筛选出2株解磷解钾细菌（PK-1、PK-2）。通过摇瓶培养，测定PK-1、PK-2发酵液中水溶性磷、水溶性钾含量和磷、钾总量；分析PK-1、PK-2解磷解钾能力；对PK-1、PK-2进行分子鉴定。结果表明，PK-1溶解无机磷能力的溶量为1.63 μg/mL，PK-2溶量为 17.26 μg/mL，溶解无机磷能力表现为PK-1?PK-2，即PK-2具有更强的解无机磷能力；PK-1溶解有机磷能力的溶量为 8.49 μg/mL，PK-2溶量为2.38 μg/mL，溶解有机磷能力表现为PK-1PK-2，即PK-1的解有机磷能力更好；PK-1溶解钾能力的溶量为8.15 μg/mL，PK-2溶量为8.49 μg/mL，溶解钾能力表现为PK-1?PK-2，PK-1 和PK-2的解钾能力接近。经16S rDNA序列分析，初步鉴定PK-1为肠杆菌属（Enterobacter），PK-2?檠挎吒司?属（Bacillus）。供试菌株PK-1和PK-2具有良好的解磷解钾功能，可为进一步研制专用的番木瓜微生物肥料提供菌种资源和依据。 　　关键词：番木瓜；根际促生菌；解磷；解钾；鉴定；肠杆菌层；芽孢杆菌属 　　中图分类号： S182文献标志码： A文章编号：1002-1302（2017）06-0247-04 　　植物根际促生菌（plant growth promoting rhizobacteria，简称PGPR）指生存于植物根际系统，并能促进或调节植物生长的一类微生物，通常具有固氮、溶磷、解钾、产生植物激素、分泌抗生素等生理活性[1-4]。目前，研究比较多的是PGPR的解磷、解钾、固氮功能。磷和钾是植物生长必需的大量营养元素，而我国土壤中可供植物直接吸收利用的磷、钾资源有限，在生产实践中，为了提高作物产量，每年都要向土壤中施入大量的可溶性磷肥和钾肥，造成土壤板结、地力下降、环境污染、农产品品质下降等问题[5]。PGPR在其生命活动过程中通常能将土壤矿物质中难以被植物吸收的磷、钾释放出来，转化成易溶性的养分，提升有效磷、有效钾的供应水平，促进植物生长。随着人们环保意识的日益提高，应用PGPR的解磷解钾能力促进植物生长及提高其产量越来越受到关注，PGPR作为一种宝贵的资源逐渐成为研究热点[6]。番木瓜（Carica papaya L.）是热带、亚热带地区广泛栽培的多年生常绿大型草本植物，别称万寿果、木瓜，果实含有丰富的糖类、胡萝卜素、木瓜酶，富含钙、磷、钾等矿物质，还具有清除自由基、增强人体免疫力、抗病原体等保健作用[7-8]。目前，PGPR解磷解钾作用在许多作物上的应用已得到诸多报道，但在番木瓜上的应用却鲜有报道。因此，开展番木瓜PGPR菌株解磷解钾能力的研究，对研制新型微生物肥料以提高番木瓜的产量和质量具有重要的现实意义。 　　本研究从番木瓜根际土壤中筛选出2株PGPR，并对其解磷解钾作用进行分析，旨在为进一步研究番木瓜PGPR的生态适应性，研制番木瓜的微生物肥料提供理论依据。 　　1材料与方法 　　1.1仪器与试剂 　　所用仪器主要有超净工作台、电热恒温鼓风干燥箱、立式压力蒸汽灭菌器、恒温培养振荡器、原子吸收分光光度计、紫外-可见分光光度计、高速冷冻离心机、电子分析天平、纯水机、恒温水浴锅、多功能梯度PCR仪、电泳仪、凝胶成像仪、微波炉、乙醇灯、1 L移液器；所用试剂主要有琼脂、琼脂糖、蛋白胨、酵母浸出汁、牛肉膏、氯化钠、葡萄糖、2×Taq PCR MasterMix。 　　1.2土样 　　采自云南省西双版纳州普文镇的番木瓜地，土壤系番木瓜的根际土壤。 　　1.3培养基 　　1.3.1菌株分离纯化培养基菌株的分离纯化采用牛肉膏蛋白胨培养基（NA）。 　　1.3.2解无机磷培养基（1）解无机磷固体培养基：葡萄糖1000 g，Ca3（PO4）2 5.00 g，MgCl2 5.00 g，MgSO4?7H2O 0.25 g，KCl 0.20 g，（NH4）2SO4 0.10 g，琼脂15.00 g，溶于去离子水中，加热溶化，混匀，加去离子水定容至1 L，调pH值为7.4，分装于250 mL锥形瓶中，121 ℃灭菌20 min，分装。（2）解无机磷液体培养基：除缺少琼脂外，其他物质含量与解无机磷固体培养基相同。 　　1.3.3解有机磷培养基解有机磷固体培养基： 　　（1）蒙金娜基础培养基。葡萄糖10.00 g、（NH4）2SO4 050 g、MgSO4?7H2O 0.30 g、NaCl 0.30 g、KCl 0.30 g、FeSO4?7H2O 0.36 g、MnSO4?H2O 0.03 g、CaCO3 500 g、琼脂15.00 g