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iPS细胞研究进展 　　摘 要 本文内容主要包括三个部分。第一部分，iPS细胞的定义、特征和医用价值。第二部分， iPS细胞诱导因子和诱导方法。iPS细胞诱导基因主要有四个：Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4。Oct4和Sox2在诱导重构iPS细胞的过程中是必须的， Klf4和c-Myc的作用则是改变染色质的结构，有利于Oct4和Sox2的结合，提高诱导成功的效率。方法一，使用逆转录病毒为载体，可能会因为外源基因插入细胞基因组，干扰了内源基因的表达，容易诱发癌症；方法二，使用转染质粒，用一种小分子物质代替以往使用的一种癌基因，就可以成功得到iPS细胞；方法三，无需逆转录病毒载体诱导产生iPS细胞，因此也就避免了使用逆转录病毒载体所带来的基因插入、整合、突变等问题。第三部分，国内和国外iPS细胞的研究进展。 　　关键词 iPS细胞 诱导因子 逆转录病毒 转染质粒 　　中图分类号：Q819 文献标识码：A 　　2006年日本科学家山中伸弥在世界著名学术杂志《细胞》上率先报道了iPS干细胞的研究。他们把Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4这四种转录因子基因克隆入病毒载体，然后引入小鼠成纤维细胞，发现可诱导其发生转化，产生的iPS细胞在形态、增殖能力、表观遗传修饰类，以及细胞分化等方面都表现出了与胚胎干细胞相似功能，他们将这类细胞命名为诱导多功能干细胞。2007年，科学家们运用相似的方法，通过病毒转导，将Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4导入人的成纤维细胞，成功获得了人的iPS细胞。人iPS细胞的获得使人们开始将视线投向iPS细胞的医疗应用之中，运用iPS技术获得病人特异的iPS细胞，进行药物筛选或基因治疗。近年来对于IPS细胞研究，取得了很大的突破，这为组织工程提供了丰富的细胞来源。 　　与ES细胞相比，iPS细胞的获得方法相对简单和稳定，不需要使用卵细胞或者胚胎，因而具有更广泛的应用前景。iPS细胞的建立进一步拉近了干细胞和临床疾病治疗的距离，iPS干细胞在细胞替代性治疗以及发病机理的研究、新药筛选方面具有巨大的潜在价值。iPS干细胞在体外已成功地被分化为神经元细胞、神经胶质细胞、心血管细胞和原始生殖细胞等，在神经系统疾病、心血管疾病等方面的作用也日益呈现。 　　1 iPS细胞诱导外源基因和诱导方法 　　1.1 iPS细胞诱导外源基因 　　IPS细胞的建立主要是通过病毒介导或者其他的方式将若干多个多能性相关的外源基因导入已分化的细胞即宿主细胞中，在合适的培养条件下，这些已分化的细胞就会转化为iPS细胞。 　　iPS细胞诱导关键外源基因有四个，分别是： Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4。 　　Oct4，是POU转录因子家族中的一员，是哺乳动物胚胎发育的一个关键的调控因子，能与含八聚体基序的DNA结合从而调控下游靶基因的转录。它主要表达于胚胎干细胞及生殖干细胞中，对于维持胚胎干细胞的多潜能性和自我更新具有极其重要的作用。Sox2基因是编码转录因子的主控基因家族的一个成员。转录因子是与DNA结合并调节其他基因表达的蛋白质。癌症基因c-Myc，是一种人类最容易过度表现的致癌基因，它可以抑制ES细胞的分化，对某些成体干细胞的自我更新起到一定的作用。c-Myc基因的产物为62KD的磷酸化蛋白P62c-mgc，是由c-Myc基因的外显子2和3共同编码的由439个氨基酸组成的蛋白质，定位细胞核内，为核蛋白，依C-one编码产物，功能分类，c-Myc癌基因属核蛋白基因，具有转化细胞的能力，并具有与染色体、DNA结合的特性，在调节细胞生长、分化及恶性转化中发挥作用。Klf4上皮锌指转录因子，是进来我们研究较多的Klf家族的成员，它能够通过与下游基因启动子区的Klf4结合元件相结合，从而直接调控下由基因的转录，是生物体内一个重要的转录因子，主要调节体外细胞的增生与分化。 　　生化及分子生物学研究发现，Oct4和Sox2基因对于胚胎干细胞多能性的维持具有非常重要的作用，在诱导重构iPS细胞的过程中是必须的，正是这两个转录因子维持了人类iPS细胞的多潜能性，而Klf4和c-Myc的作用则是改变染色质的结构，有利于Oct4和Sox2的结合，提高诱导成功的效率。 　　有研究表明，两个原癌基因Klf4和c-Myc可能在重编程宿主细胞增殖中起到一定的作用，加速了形成过程，提高了iPS细胞的诱导效率。一种推测是Klf4和c-Myc这两个因子共同作用，使宿主细胞发生了类似于癌化的转化。另一种猜测则认为c-Myc基因修饰了宿主细胞的染色体状态，活化了相关基因，从而使得重编程基因更接近于所必需的基因。第三种猜测则认为c-Myc基因的过表达可以促进DNA的复制，从促进外源重编程因子调控其重建其表观遗传状态，而Klf4可以刺激