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Cre―loxp系统构建及在牙釉质发育中应用 　　【摘要】 Cre-loxp系统是近年来广泛应用在各领域的重组酶系统。该系统由组织特异性重组酶cre和loxp位点组成。可以通过对特定的DNA序列进行准确的切割及连接，达到在基因水平上对生物体进行定向遗传改造的目的。牙釉质的发育离不开各种转录因子的作用，利用该系统对各转录因子的缺失或突变的研究，探讨特定时间、特定部位目的基因的异常改变对牙釉质发育的影响。 　　【关键词】 Cre-loxp系统； loxp位点； 重组酶cre； 转录因子 　　中图分类号 R78 文献标识码 A 文章编号 1674-6805（2016）11-0160-03 　　【Abstract】 Cre-loxp system is recombinant enzyme systems，widely used in various fields in recent years.The system consists of a tissue-specific recombinase cre and loxp site components.Through specific DNA sequences accurate cutting and connection，at the genetic level to achieve the purpose of orienting genetically engineered organisms.Enamel development is inseparable from the role of various transcription factors，utilization of the system for each missing or mutated transcription factors，investigate the effect of abnormal changes in a particular time parts of the gene of enamel development. 　　【Key words】 Cre-loxp system； Loxp site； Recombinase cre； Transcription factors 　　First-author’s address：Affiliated Hospital of Binzhou Medical，Binzhou 256600，China 　　doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.11.090 　　随着国民经济的日益发展，人们对口腔保健的意识也越来越强。口腔疾病的预防也越来越引起大家的注意，基因水平上对口腔致病微生物的研究越来越引起重视。龋病成为危害人类牙齿健康的首要因素。龋病的主要危害就是牙釉质的破坏。预防和保护牙釉质成为龋病预防的首要措施。由于鼠和人在基因组成上的相似性，小鼠模型越来越多的应用在基因研究上。 　　转基因小鼠的制备主要通过受精卵原核显微注射或胚胎干细胞打靶而获得。然而这两种方式获得的模型都有其局限性。受精卵原核显微注射获得的小鼠模型，由于某些基因表达产物使细胞或组织不能耐受，会出现胚胎致死性。基因敲除的小鼠，在全身的基因组中都会出现基因的缺失，常会影响其繁殖，无法对完成发育后期的基因功能进行分析。为了解决这一难题，人们力求获得一种方式可以定点插入基因、在特定组织表达，按照人们的意愿对目的基因进行调控。 　　特异性重组酶系统是在重组酶的催化作用下，两段DNA序列特定位点发生重组并连接[1]。位点特异性重组酶系统和传统的基因修饰技术的结合，克服了传统的转基因技术位点随机性和基因敲除的胚胎致死性。重组酶系统种类很多，包括来自埃希大肠杆菌噬菌体P1的cre/loxp和来自酿酒酵母2 μ的FLP/FRT系统结合酵母pSR系统等，而在这些系统中，研究最为深入、应用最为普遍的就是cre/loxp系统[2]。通过基因打靶将loxp位点瞄定在目的基因的两侧，利用cre重组酶可以特异性识别loxp位点，介导loxp位点间DNA片段重组的特性，设计组织特异性启动子启动cre基因在特定的组织特定的时间表达[3]，达到在特定部位特定时间敲除目的基因的目的。 　　1 Cre-loxp系统的作用机制 　　Cre-loxp系统由cre重组酶和loxp位点组成[4]。 　　1.1 cre重组酶 　　cre重组酶是由噬菌体P1中发现分子量为38 KD的蛋白质序列[5]，它是Int家族的一员。cre重组酶属于整合酶的一种，不仅具有催化活性，而且还具有和限制酶相似的活性，可以对特定的DNA序列进行剪切和切割。由于该重组酶是由单个的核苷酸序列组成，因