Rb及E2F―1在多发性骨髓瘤骨髓组织中表达及临床意义.docVIP

Rb及E2F―1在多发性骨髓瘤骨髓组织中表达及临床意义 　　摘要：目的 通过研究细胞周期调控因子Rb及E2F-1在多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）骨髓活检组织中的表达情况，探讨它们对MM的发生、发展、转归的影响及其作用机制。方法 采用免疫组织化学方法，检测69例MM患者和15例对照者骨髓组织中Rb及E2F-1的表达情况。结果 Rb在MM组的表达强度明显低于对照组（P0.05）；在不同分型组中，Rb和E2F-1阳性率及表达强度均无明显差异（P0.05）；Rb在治疗前后CR（完全缓解）组阳性率及表达强度明显高于NR（未完全缓解）组（P0.05），治疗后CR组的阳性率及表达强度明显低于NR组（P0.05）。相关性分析显示：Rb与E2F-1在MM骨髓活检中的表达呈负相关（P0.05）。结论 Rb低表达/缺失及E2F-1的高表达与MM的发生有密切关系。随着MM疾病分期的增加，Rb有逐渐降低趋势，与MM的预后有关。 　　关键词：多发性骨髓瘤；Rb；E2F-1；骨髓活检；免疫组化 　　多发性骨髓瘤是血液系统恶性肿瘤，病因尚不十分明确。Rb及E2F-1作为细胞周期调控因子在肿瘤发生过程中具有重要作用。本研究采用免疫组化方法检测骨髓活检组织中Rb及E2F-1表达情况，比较两者在不同分组中阳性率及表达强度，分析它们在MM发生、发展中的作用。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 收集河北医科大学第三医院血液科2010年6月～2012年6月确诊的MM患者骨髓活检标本共69例，MM诊断及疗效标准参阅《中国多发性骨髓瘤诊治指南2011修订版》[1]。将69例MM骨髓活检标本按多发性骨髓瘤ISS临床分期标准分为：Ⅰ期21例，Ⅱ期20例，Ⅲ期28例；根据异常免疫球蛋白分泌情况分为四种类型：IgG型25例，IgA型19例，轻链型19例，其它型6例（其中包括IgD，不分泌型，IgM型及IgE型，由于病例数均偏少未做具体分析讨论）。男38例，女31例，中位年龄61岁（28～81岁）。 　　69例MM患者均经VAD方案（长春新碱0.4mg/d，静点d1-4；阿霉素10mg/d，静点d1-4；地塞米松40mg/d，静点d1-4、9-12、17-20）化疗6个疗程后，其中有38例患者达到完全缓解（CR）；31例患者未达完全缓解（NR）。 　　收集同时期营养不良性贫血并除外恶性肿瘤患者骨髓活检组织标本15例作为对照组，其中男7例，女8例，中位年龄53岁。MM组与对照组间年龄分布及性别比例无明显差异（P0.05）。 　　1.2主要试剂和免疫组化染色 兔抗人Rb单克隆抗体购自美国Bioword technology公司，兔抗人E2F-1单克隆抗体购自武汉博士德生物技术有限公司，DAB显色剂、PV试剂盒等均购自北京中杉生物技术有限公司，切片用链菌素亲生物素-过氧化物酶连接法（strapta-vidin peroxides conjugate method， Sp方法）进行染色。 　　1.3染色结果判断 细胞核或细胞浆中出现棕黄色染色即为阳性。结果判断采用双评分半定量法。随机观察5个高倍镜下（×400）视野，每个视野计数200个细胞，共计1000个细胞，根据阳性细胞数和染色强度进行评分：阳性细胞数?5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，?50%为3分。显色度按细胞显色有无及深浅计分：细胞无显色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。将两项相加为阳性强度总积分，0分为阴性表达（-），1～2分为低表达（+），3～4分为中度表达（++），5～6分为高表达（+++）。 　　1.4统计学分析 应用SPSS16.0统计软件分析数据。应用Chi-Square test检测各指标在不同分组间阳性率的差别。不同分组间阳性积分的比较均采用非参数检验法分析，三组以上应用Kruskal -Wallis H法，两两分组间的比较采用Mann-Whitney U检验。采用Pearson相关性检验分析两种指标间的相关性。设P0.05为有统计学差异。 　　2 结果 　　2.1对照组中Rb及E2F-1的表达情况 Rb与E2F-1均定位于细胞核。15例对照组中有14例表达Rb，阳性率为93.33%，其中0例（+）、10例（++）、4例（+++）；5例表达E2F-1，阳性率为33.33%，其中4例（+）、1例（++）、0例（+++）。见表1。 　　2.2 Rb在MM骨髓活检组织中的表达：MM组中有45例表达Rb，阳性率为65.22%，其中2例（+）、42例（++）、1例（+++），对照组阳性表达率及表达强度均明显高于MM组（χ2 =4.659，P0.05）。在治疗前，CR组29例表达Rb，其中2例（+）、26例（++）、1例（+++）；NR