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SAHA预处理提高初进高原致死性失血性休克大鼠早期生存率研究 　　DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2014.08.014 　　作者单位：730030 兰州，兰州军区兰州总医院麻醉科 　　通信作者：耿智隆， Email：zlgch@ 　　高原环境与平原有着明显的差异，初进高原，机体尚未适应高原低气压、低氧且干燥寒冷的急剧变化，如果发生失血性休克，全身反应十分严重，病情进展迅速，救治极为困难，加之高原交通运输不便，难以及时提供复苏液体，常常延误黄金救治期，伤员很难度过最初的60 min，超过120 min和180 min更加困难。近年来，休克的药物治疗由于其脏器保护作用和便于运输携带的突出特点，正在受到越来越多的关注，其中组蛋白脱乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitors，HDACI）是一类抑制组蛋白脱乙酰化酶活性的药物，能提高DNA转录水平，引起一系列亚细胞分子水平改变，具有非常广泛的生物学作用，可用于癫痫、恶性肿瘤和神经退行性变等疾病的治疗[1-2]，研究发现其对失血性休克动物有救治作用[3-5]， HDACI中羟肟酸盐类的SAHA对平原地区致死性失血性休克大鼠的救治效果确切[3， 6-7]，但尚未见针对高原地区的研究及失血前预处理的研究。本研究通过建立初进高原致死性失血性休克大鼠模型，探讨SAHA预处理对其早期生存率是否有影响，以期对高原急性失血性休克患者的药物救治研究有一定推动作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物及分组 　　健康成年雄性清洁级SD大鼠36只，体质量（260±20）g，均由甘肃省中医学院动物实验中心提供（海拔1520 m）。大鼠分批运往实验地（兰州榆中马衔山，海拔3780 m），每批动物于5 d内完成实验。随机数字法将大鼠分为3组（n=12）：假手术组（Ⅰ组），NS预处理组（Ⅱ组），SAHA预处理组（Ⅲ组）。 　　1.2 实验试剂及设备 　　SAHA（德国默克制药有限公司）；异氟醚（英国雅培制药有限公司）。ALC-MPA2000多功能生物信号分析系统、ALC-HTP实验动物恒温系统、 ALC-IP可编程注射泵均为上海奥尔科特生物科技有限公司产品；全自动血气分析仪（GEM公司，premier 3000）。 　　1.3 致死性失血性休克大鼠模型建立及给药方法 　　大鼠实验前不禁食水，使用3%异氟醚-氧气诱导麻醉，0.5%～1%异氟醚-空气维持麻醉，仰卧位固定，0.75%布比卡因局部浸润麻醉。分离并暴露双侧股动脉及右侧股静脉，分别置入PE50管，经右侧股动脉管连接多通道生理检测仪，持续监测平均动脉压（MAP）及心率。稳定后建立初进高原大鼠致死性失血性休克模型：40%总血容量（total blood volume，TBV）在10 min内由左侧股动脉放出，随后50 min经右侧股静脉放出15%TBV，分别模仿临床中患者受伤后即刻出现的快速失血及简单救治后慢性出血的过程，失血过程通过可编程注射泵实现。TBV计算按下列公式： TBV（mL）=体质量（g）×0.06（mL/g）+0.77[3， 8- 9]。于失血结束60 min后撤PE50管，结扎血管、缝合伤口，归笼观察180 min。实验过程中通过动物恒温系统维持大鼠直肠温度于36.5～37.5 ℃。 　　Ⅰ组行手术，不给予失血处理；Ⅱ、Ⅲ组手术后制作初进高原大鼠致死性失血性休克模型。Ⅱ组于实验前24 h和失血前两次经皮下给予0.25 mL NS预处理，Ⅲ组于实验前24 h和失血前两次经皮下给予溶于0.25 mL NS的SAHA（7.5 mg/kg）溶液预处理[3， 10-11]。 　　1.4取材及指标测定 　　1.4.1 MAP监测记录 　　持续监测大鼠MAP，分别记录失血前，失血结束时、失血后15 min、失血后30 min、失血后45 min和失血后60 min MAP值。 　　1.4.2 血气分析 　　分别在失血前、失血结束时和失血后60 min，3个时间点取动脉血行血气分析，检测大鼠动脉血pH值、PaCO2、PaO2、BE值和Lac浓度，每次0.3 mL，该取血量计入失血总量中。 　　1.5 统计学方法 　　计量资料数据以均数±标准差（x±s）表示，使用SPSS 17.0处理系统，两两比较采用LSD单因素方差分析，生存率比较采用χ2检验。以P0.05为差异具有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 试验参数 　　三组大鼠体质量、总血容量、失血量差异无统计学意义。见表1。 　　2.3 三组大鼠MAP在不同时间点变化情况 　　三组大鼠失血前MAP值无统计学意义。从失血结束时到失血结束后60 min，与Ⅰ组比较，Ⅱ、Ⅲ组MAP明显降低（P